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人血清白蛋白与手性药物相互作用的毛细管电泳研究 I．液相预柱毛细管电泳技术定量可靠性的考察* 丁永生 林炳承** （中国科学院大连化学物理研究所 大连 116023） 提 要 以药物Verapamil(VER)与人血清白蛋白H（SA）相互作用体系中游离的药物对映体浓度定量测定为 目标，建立了一项适用于相互作用研究的液相预柱毛细管电泳L（PC-CE）技术。通过对该技术的考察，确定了这 项技术的定量可靠性。在生理pH值条件下P（H7.4，离子强度I=0.17），使药物与人血清白蛋白达到结合平衡。 在毛细管电泳手性拆分[pH2.5缓冲液；三甲基-β环糊精T（M-β?-CD）浓度为45mmol/L]柱 3（2cm×50μm）内 预先注入一段生理pH缓冲液，形成一段液相预柱 2（.8cm）。在预柱中，利用蛋白和药物在生理pH下的电泳特 性差异，使HSA不进入手性拆分区域，而药物以平衡浓度进入拆分系统。结合毛细管电泳前沿分析技术，药物 对映体在相互作用体系中的游离浓度的测定通过手性拆分实现。对7个不同浓度比的药物-白蛋白样品体系进 行考察，具有良好的重现性相（对标准偏差RSD=2.17％～5.02％,n=4）；定量分析的相对误差在1.4％～ 58％范围内。 关键词 毛细管电泳，液相预柱，相互作用，人血清白蛋白，药物 分类号 O658 1 前言 不同的电泳特性[56。HSA的等电点为4.9，在此条 件下带负电荷，而碱性药物则带正电荷。采用没有电 生物蛋白分子与药物分子相互作用的立体选择 渗流的涂渍毛细管柱，在电场 从（正到负）作用下，碱 性的研究一直受到重视。常规的基于HPLC的渗析 性药物向负极迁移，进入手性拆分缓冲液。HSA向 或超滤技术样品需要量较多，在预处理过程中难以 正极迁移，不进入手性拆分系统，达到筛除目的。 避免药物在膜上的吸附或一定程度的膜泄漏或透析 不足[1]。亲和毛细管电泳 A（CE）也存在着运行电解 3 实 验椴 部 分 质中的蛋白在管壁的吸附、蛋白的紫外吸收对低浓 度药物测定的干扰以及淌度变化的不重复性等因 3.1试剂与材料 素[2]。1995年，Ohara等人[3]首次使用了在进样前注 药物Verapamil由德国Tuebingen大学提供； HSA脱（脂肪酸和球蛋白，SigmaNo.3782）购于 入一段与背景溶液不同的缓冲液的毛细管电泳方 法。由于缓冲液的pH值对生物分子的电泳特性有 Sigma(St.Louis,MO,USA)；三甲基-β环糊精 T（M-βCD）购于Cyclolab公司 匈（牙利）；手性拆分 重要的影响，而且可以改变其迁移方向[4]，因此，这 一方法的出现为以样品预处理为目的的液相预毛细 运行缓冲液：pH2.5磷酸盐缓冲液，TM-β?-CD浓度 45mmol/L；±（）VER和 ±（）VER-HSA混合液由生 管电泳L（PC-CE）技术提供了应用的可能性，例如有 可能解决在一次进样中完成微量样品的预处理、分 理pH缓冲液 p（H7.4磷酸盐缓冲液，离子强度I= 离、手性拆分和微量定量等全过程。但是，应用的前 0.17）溶解配制；实验用水均为自制亚沸去离子水。 提是这种技术在整体上的可靠性，而这种可靠性在 3.2 仪器 很大程度上是通过定量的可靠性来体现的。本文所 Bio-FocusTM3000型毛细管电泳仪 (Bio-Rad, 进行的工作是以碱性