生物芯片的再生性能：吡咯结合的抗体抗原相互作用.pdfVIP

生物芯片的再生性能：吡咯结合的抗体/抗原相互作用 SPRi 技术（表面等离子体共振成像）测定生物的相互作用时，很多情况下，需要 进行数百次的相互作用与再生。为了满足这种需求，Horiba Scientific 开发了一种结合 电化学聚合的表面化学。它通过电聚合将吡咯结合生物分子共聚固定在 SPRi BiochipTM(生物芯片)上。使用该技术将受体固定在传感器芯片上，可以再生超过 100 次而不失去活性。在此我们通过抗卵清蛋白/ 卵清蛋白间的生物相互作用模型来验证此 性能。 材料和方法 吡咯抗卵清蛋白和吡咯小鼠Ig G 结合物的准备与固定 在室温下，将抗卵清蛋白与吡咯-NHS 在磷酸盐缓冲液中结合2 小时。然后，将抗 卵清蛋白在含有50 mM PO4、50 mM NaCl 和10%甘油的磷酸缓冲液中脱盐。 依照相同方法将小鼠IgG 与吡咯-NHS 结合作为阴性对照。 点样溶液（含10%甘油的磷酸盐缓冲液）包含20 mM 的自由吡咯和浓度为8 　M 的抗体。通过电化学过程，SPRi ArrayerTM(点样仪)可将抗体固定在生物芯片上。工作 电极（棱镜金表面）和对电极（位于点样针）之间电压为2V，持续时间100 ms，以完 成吡咯抗体共聚物的聚合。每次点样后都用蒸馏水冲洗针尖。 49 个抗卵清蛋白与7 个小鼠IgG 样品点被固定在SPRi BiochipTM 生物芯片上。 SPRi 实验 点样后，生物芯片放入SPRi PlexTM 分析仪。缓冲溶液为10 mM PBS。 注射溶液 用缓冲液（10 mM PBS）将卵清蛋白稀释为20 　g/mL 。将其与100 mM 甘氨酸/ HCl pH=2.0 交替注入（高达112 次）流动池中，此时可在无标记状态下实时监测相互作用 与再生步骤。 所有注射均自动进行。 结果与讨论 固定在生物芯片上蛋白质的SPRi 定量 相互作用曲线 为了便于观看，仅将4 个相互作用和再生步骤显示如下（图2 ）。 图2 抗卵清蛋白(aOva)和阴性对照（小鼠IgG(mlgG)）的相互作用曲线（相互作用/再生） 从图2 中可以观测到卵清蛋白和它的互补抗体间的特异性反应，而小鼠IgG 仅能检 测到背景。 结合到抗卵清蛋白上的卵清蛋白的数量是恒定的。可以观测到信号每次都回到了之 前的基线，表明再生效果很好。通过减去抗卵清蛋白阴性对照可以很容易的校正轻微的 飘移（图3 ）。 图3 减去阴性对照后的动力曲线 蛋白质的量与进样次数 图4 所示的直方图代表结合到抗卵清蛋白抗体上卵清蛋白的量。每次卵清蛋白进样 后用甘氨酸/ HCl 再生。 可以观察到蛋白质的量、与抗卵清蛋白的相互作用在试验开始时减少。25 次进样 后，信号维持稳定。事实上，这是由固定相引起的：在最初，当生物芯片再生时，一些 抗卵清蛋白分子没有完全固定到生物芯片的表面而被移除。 图4 注射20g/mL 卵清蛋白后固定的蛋白量与再生次数的对比 结论 本实验展示了Horiba Scientific SPRi 仪器的稳定再生性能。在生物芯片上重复了 112 次卵清蛋白进样与再生（甘氨酸/HCl ）过程，并且超过100 次的再生后，生物芯片 仍保持良好的活性，如直方图（图4 ）所示。 吡咯抗体固定到SPRi BiochipTM(生物芯片)上可进行超过 100 次的蛋白质相互作 用/再生而不失活性。 No:HSC-SPR00AN06-V1(Layout:201112)