体内原位基因组编辑——介绍一种新的基因治疗技术.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2011, 33(9): 1062– 1065 http ://www.cj 热点评析 体内原位基因组编辑——介绍一种新的基因治疗技术 黄 芳　郭礼和 (复旦大学上海医学院, 上海200032) 3 ZFN 近几年, 随着人工设计和合成的锌指核酸酶 蛋白常包含了 个锌指结构域, 一对 蛋白就可以 (zinc finger nucleases, ZFNs) 24 DNA 及转录激活因子样效应 识别 个碱基对的 序列, 保证了它的序列专一 物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases, 性。TALEN 的DNA序列识别结构域来自一种植物 TALENs)等技术的建立和发展, 对高等动物包括人 病原菌——黄单胞菌的TALE蛋白, 这类蛋白由病菌 类在内的基因组DNA可以进行体内原位改造或修 分泌进入植物细胞, 结合并激活宿主细胞特异基因, 饰。这项技术也称在体基因组编辑(in vivo genome 为细菌入侵植物所需要。TALE蛋白的DNA结合域 editing) 7 14 Nature 由一串连续排列、序列高度同源的蛋白结构域模块 。今年 月 日 杂志发表的一篇研究 ZFN 34 12 论文, 报道了在血友病小鼠模型上利用 技术对 构成, 每个模块大小为 个氨基酸, 模块的第 位和 模型小鼠肝脏细胞基因组进行在体编辑, 重建了疾 13位的氨基酸的变化, 可以使得该模块蛋白分别专 病小鼠的凝血功能[1] 1 , 这一工作可谓是这个领域最 一性识别 个特定的碱基对, 因此, 根据靶序列的特 新发展的一个代表。本文将介绍这一工作, 并对 征, 组装这些模块就可以形成结合不同DNA序列的 ZFNs和TALENs作一简短的描述。 结构域。目前, 报道的TALEN 的构建方法大多含有 12 TALEN 24 个模块, 因此一对 蛋白可以识别 个碱基 1 锌指核酸酶与转录激活因子样效应物 对的靶点。 核酸酶 上述两种技术目前都能够根据靶序列进行设 对患者基因组实施体内原位定向改造主要依 计, 再由基因合成完成核酸酶的构建。和TALEN 的 赖于ZFNs和TALENs这两种人工核酸酶构建技术的 方法相比, ZFNs 的分子量较小, 有一定的优势, 但 发明。两种技术在原理和方法学上很相似, 都是利 ZFNs 的构建常常需要经过筛选, 尽管最近也报道了 用人工设计和构建的基因, 编码含有两种功能结构 可以通过设计获得[2], 但相比而言, TALEN 的方法似 ( DNA Fok I [3] 域 分别识别 特异序列和限制性内切酶 催 乎更具设计性 。 ) 化序列所形成的复合蛋白酶, 利用基因工程表达技 目前