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应用指南 题 专 用 应 子 分 小 1+12 ？ 利用ITC研究低亲和力的配体片段 FBDD W. Bruce Turnbull博士 将配体分解为更小的片段能够为分析蛋白质-配体相互 然而，如果一种特定的功能基团或片段是总结合能的主 作用中关键功能基团的作用提供一种策略。能够同时占 要贡献者，则这个片段的去除将导致配体对受体具有非 据受体结合位点的低亲和力配体片段经常可以被连接在 常差的亲和力。尽管人们可以定性地推断被删除的这个 一起以形成高亲和力的抑制剂。这些研究的主要挑战在 基团对于活性是必要的，但是为了得到更详实的、定量 于测量低亲和力相互作用的热力学。这份白皮书将解决 的系统图像，有必要测量即使是最低亲和力的相互作用。 通过等温滴定量热法（ITC）研究低亲和力系统的问题。 A 主题将包括利用低于KD的受体浓度（即低的c值）工作， 拆成片段 以及置换技术如何能够用于测量非常低的亲和力，同时 A B C 遵从c值规则。这将从利用碳水化合物结合蛋白的研究 例子中得到说明。 ∆G°A A 介绍 A R R 分子识别对于从酶催化到信号转导的所有生物学过程都 ∆G°B 是一个根本性的先决条件。现代制药业正是建立在对这 B B R R 些系统的选择性干预的理念上（1）。此外，从超分子 化学到开发用于纳米技术和分子电子学的新型材料和元 件也正在实施类似的理念（2 ）。如果我们想要驾驭分 C 片段的固有贡献ΔG°C = ΔG°A - ΔG°B 子识别的全部潜能，那么我们理解复合物形成中结构 B 与热力学之间的微妙相互作用就十分必要。 低亲和力 ITC已经很快成为研究分子识别过程的一种最普通的技 术之一，而且成为测定焓和熵对整体结合自由能ΔG°的 作用所选择的技术(3–5) 。 连接片段 ΔG° = ΔH - TΔS° [1] 高亲和力 因为ITC只要求在复合物形成时有可测量的焓变化，因 此它一般适用于大多数系统。由一个ITC实验所获得的 热力学参数对发生在溶液中的所有过程进行了总结 -- 图1. （A ）配体A被分解为两个片段B和C ，它们可以被用于评估这个分 氢键的形成和断裂、构象改变、去溶剂化等。因此单个 子的这些部分对整体的结合相互作用的贡献。（B）低亲和力“片段”配