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尿样中氧氟沙星的含量测定 梁斌 陶逸伦 【摘要】目的：分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼吸系统感染的药物氧氟沙星，同时比 较 LC-UV 与LC-荧光分析氧氟沙星的区别。方法：利用 HPLC仪， 用标准曲线法来进行检测，同时采用不同的检测器来检测尿中氧氟沙星的含量。结果：LC-UV 与 LC-荧光分析法对尿液中氧氟沙星含量的测定有较高的精密度和回收率。此两种方法都比 较简便，结果正确。结论：LC-UV 与 LC-荧光分析法两种方法比较，荧光分析法的检测限比 较低，是紫外的 1000 倍；同时杂质峰更少，跟有利于对尿液，血液等的检测。 关键词： HPLC 标准曲线法 紫外检测 荧光检测 氧氟沙星为氟喹诺酮类抗生素。临床常用于敏感菌引起的泌尿、生殖系统感染、细菌 性肠胃炎、下呼吸道感染、关节炎、皮肤、软组织感染以及军团病, 沙眼衣原体等非典型致 病菌引起的伤寒、非特异性尿道炎等。为了研究氧氟沙星在体内的药物含量检测及药动学参 数的检测, 特建立氧氟沙星的高效液相色谱仪紫外与荧光检测的含量测定方法。 1 材料与方法 1．1 氧氟沙星: 氧氟沙星标准品(生产厂家: 浙江新昌制药厂) , 用流动相配制成一定的 浓度, 作为标准液。氧氟沙星片剂(100mg/片，按氧氟沙星计)为检测样品液。 1．2 试剂：甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钾、磷酸 1．3 检测仪器：Agilent 高效液相色谱仪，G1314B-VWD 紫外检测器，荧光检测器。 2 实验方法 2. 1 色谱条件：色谱柱:Eclipse Plus C18 5μm (250 mm ×416 mm)； 流动相: 甲醇：KH PO 2 4 （10mmol/L，pH=2.5-3.0）=40：60，流速:1ml/min；进样量：20μl；柱温：室温；检测波 长：紫外在 250～400nm处扫描，选取有最大吸收度处作为检测波长。实际过程中选用 294nm 作为检测波长。荧光 Ex：295nm；Em：505nm。 2.2 实验方法： 2.2.1 尿样处理：取空白尿样和尿样，13000r/min 离心10min，取上清液经 0.45μm 的水相 滤膜过滤，保留滤液。 2.2.2 氧氟沙星标准液的配制：精密称取氧氟沙星片剂 200 mg ,置 50ml 容量瓶中,以流动 相稀释至刻度,配成 4. mg/ml 的储备液，用流动相稀释 40 倍，作为标准液，浓度为 100ug/ml。 2.2.3 标准曲线的制作：分别去标准液 0.20ml、0.40ml、0.60ml、0.80ml、1.00ml 于 10ml 容量瓶中，配成不同浓度的标准液。吸取 20μl 作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙星标准 浓度对峰面积进行回归，得到回归方程。 2.2.4 空白尿液的配置：取空白尿液滤液 1ml,用流动相稀释 20 倍，吸取20μl 作为进样品。 2.2.5 尿样的配置：取尿液滤液 1ml,用流动相稀释 20 倍，吸取 20μl 作为进样品。 2.2.6 进样：先进 1 针标准品观察流动相配置是否合适,合适后,进1 针空白尿样观察有无杂 质在测定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样标准品与待测样品,标准品进样 5 针来检 验仪器精密度。 3 结果 3.1 氧氟沙星紫外检测结果 3.1.1 浓度与峰高的线性关系研究: 在2—10ug/ml 之间呈现良好的浓度与 峰面积的线性关系，见图1。 3.1.2 尿液中氧氟沙星含量的测定结果 如表 1： 图 1 紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度标 准曲线图 表 1 尿液中氧氟沙星含量测定（紫外检测器） 编号 尿液体积（ml） 峰面积 浓度（ug/ml） 排出量（mg