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应 应用WAVE生物反应器 用 园 地 快速生产临床级别的T淋巴细胞 B. Levine 临床细胞和疫苗生产部，宾西法尼亚大学附属医院，美国细胞制备与处理Cell preparation and processing 本研究介绍和比较了大规模扩增培养T淋巴细胞方 用流式细胞仪检测，刺激细胞增长前和细胞培 法：静态培养与在WAVE Bioreactor 2/10波浪生物 养末期细胞的表型，用CellQuest™软件采集分析 反应器中使用人工抗原提呈细胞或球状固相载体辅 数据，或用FlowJo软件分析测试结果。白细胞 助培养。较静态培养而言，WAVE波浪生物反应器 免疫表型使用以下荧光标记的单克隆抗体来检 灌注培养的T淋巴细胞可以在较小的培养体积中达 测，包括CD3 (SK7 ，lgG1) ，CD4 (SK3 ，lgG1) , 到更高的细胞密度。这样可以节省培养和收集过程 CD8 (SK1 ，lgG1) ，CD19 (HIB19 ，lgG1) ，CD45 中所消耗的人力，同时能减少抛弃型耗材的成本。 及 ( 2 D 1 ，l g G 1 ) ， C D 1 6 ( 3 G 8 ，l g G 1 ) 和 该方法对于生产高效和特殊功能的T淋巴细胞具有 极其重要的作用。针对临床试验所需大剂量的T淋 CD45(H130 ，lgG1) 。 巴细胞，这将会产生新一代的细胞治疗方法。 使用人工抗原提呈细胞高效培养T淋巴细胞 在T淋巴细胞结合抗原提呈细胞(APC ) 的作用下，T 淋巴细胞协调体内免疫反应，从而导致其增殖和 克隆扩增。这个复杂的多级过程可以通过在体外 将T淋巴细胞结合到固定化的抗CD3和抗CD28 的 单克隆抗体上来重现(1-3) 。据报道，该激活方法 可以最有效刺激人类多克隆T淋巴细胞的增长(2)， 而且不需要外源性生长因子或其他细胞的帮助。 据此，T淋巴细胞可以在体外迅速的增殖，达到临 床治疗所需要的规模(4-9) 。 最近，源于慢性粒细胞白血病白细胞系K562成功 开发出抗原提呈细胞aA PC [10- 12] 。这些强化的 细胞基的aA PC可以在WAV E 生物反应器中产生出 图1. T淋巴细胞和包被了抗体的微球。 主细胞库(Master Cell Bank)，用于临床试验。 体外制造过程中细胞的分离与扩增 WAVE生物反应器的贡献 临床级别细胞扩增来源于研究对象或健康的捐助 虽然T淋巴细胞可在最大为1500ml的静态培养袋 者体内分离的外周血单核细胞(PBMC) 。外周血单 中培养，但是高于2x 109细胞量的培养则需要更 核细胞经过洗涤去除特定种类的细胞。这些外周 多的静态培养袋，这样就需要增加塑料袋和劳 血单核细胞，淋巴细胞，富集的T细胞受到包被了 动力的支出。临床操作需要的T细胞量大于1x 抗-CD3/CD28Mab微球的刺激生长(1,2) ，微球和 1010 。制造空间，劳动力需求，以及需要制备多 细胞的比例3 ：1。细胞在添加了5%人白, 2 mM L- 个病人剂量的花费可能会阻碍生产。WAVE波浪 glutamine, 20 mM HEPES, 和100 IU/ml rhIL-2的X- 反应器则可以消除这个障碍，整个生产过程都 V IVO™ 15无血清培养基中培养