阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌活性研究.docVIP

阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌活性的研究 李兰，何家康，汤树生，张朝明，郭召绪，肖希龙* （中国农业大学 动物医学院，北京 100193） 摘要：为了考察阿莫西林与硫酸粘菌素的联合抗菌活性，进行了阿莫西林与硫酸粘菌素单用及联用对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、链球菌以及巴氏杆菌的体外药敏试验。采用微量稀释法测定两药对5种病原菌的最小抑菌浓度，依据所测结果，用棋盘稀释法测定两药联用时的FIC指数，判断其联合抗菌活性。结果表明，在57株受试菌中，呈协同作用的占7.02%，相加作用的占85.96%，无关作用的占7.02%，无拮抗作用。表明阿莫西林与硫酸粘菌素联用主要呈现相加作用，两者联用可以增强药效。 关键词: 阿莫西林；硫酸粘菌素；联合抗菌；FIC指数近年来，我国兽医临床畜禽疾病多呈混合感染或继发感染单一抗感染药物多种病原体感染，联合用药克服单一抗感染药物抗菌范围限。兽医临床上阿莫西林金葡菌、链球菌等G+感染硫酸粘菌素大肠杆菌、等G-感染。阿莫西林硫酸粘菌素畜禽疾病目前，国内尚未见阿莫西林与硫酸粘菌素联合抗菌作用的研究报道本试验旨在通过考察阿莫西林与硫酸粘菌素联合用药的体外抗菌活性，为复方制剂的研制提供科学依据。 材料 1.1 供试药品 阿莫西林：含量99.5%，批珠海联邦制药股份有限公司提供；硫酸粘菌素：含量23694IU/mg，批号N0710003J，丽珠集团福州福兴制药股份有限公司提供。 1.2 受试菌株 大肠杆菌17株、金黄色葡萄球菌10株、沙门氏菌８株、链球菌16株、巴氏杆菌６株（均由中国农业大学药理与毒理教研室提供，系临床分离致病菌)。质控菌为大肠杆菌ATCC25922，购自中国药品生物制品检定所。 1.3 培养基 MH肉汤、小牛血清（供链球菌，巴氏杆菌培养用）。 方法 2.1药物储备液的配制及保存 抗菌药物储备液的配制方法见表1。两药配制后无菌分装至2mL塑料离心管，封口后置于-20冰箱保存，阿莫西林有效期1个月，硫酸黏菌素有效期3个月。2.2 菌液的制备 菌种经复壮、重新划板分离单个菌落，接种到2mLMH肉汤中，于37℃培养 12h。以平板计数法进行细菌计数，用MH肉汤稀释使菌液最终浓度为1×106CFU/mL。 2.3 药物原液的稀释 参照CLSI提供的药物敏感性范围及已发表文献报道的阿莫西林、硫 酸粘菌素对上述5种细菌的MIC值，确定稀释药物溶液的浓度范围。试验时用MH肉汤稀释至所需工作浓度。表1 抗菌药物储备液的配制 抗菌药物 溶剂 储备液浓度(μg/mL) 阿莫西林 pH6.0，0.1mol/L磷酸缓冲液 1280 硫酸粘菌素 超纯水 2560 2.4 单药最低抑菌浓度(MIC)测定方法 取灭菌的96孔板，A-H八排分四组，每组测1株菌。无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液由低浓度至高浓度分别加到96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔每孔100μl，第12孔不加药液作为生长对照。接着将制备的菌悬液每孔100μl加入第1至11孔。第12孔加入200μl菌液，作为阳性对照。阴性对照及质控菌的MIC均在单独的96孔板上进行。密封后将96孔板置于37℃恒温培养箱内培养16～20h后观察记录结果。试验重复三次。链球菌试验的孵育时间为20～24h。 2.5 联合药敏试验 以单药最低抑菌浓度（MIC）试验结果为依据，肉汤稀释棋盘法设计两药的4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍、1/8倍和1/16倍MIC进行7×7联合。将阿莫西林、硫酸粘菌素原液用MH肉汤稀释至所需药物浓度。如表2所示，选取96孔板A-H排的1-8孔作为试验区域，阿莫西林的7个浓度由低至高以纵列方式分别从第7纵列至第1纵列加入，每孔50μl，第8纵列作为硫酸粘菌素的单药对照。硫酸粘菌素的7个浓度由低至高以横列方式分别从G排至A排加入，每孔50μl，H排作为阿莫西林的单药对照。阿莫西林、硫酸粘菌素的单药对照孔内加相对应浓度的药液100μl。然后最后各孔加入100μl上述制备的菌悬液，H排第8孔加200μl菌液，作为阳性生长对照。阴性对照在单独的96孔板中进行。将96孔板放于37℃恒温培养箱，18小时后观察并记录结果。 2.6 结果判定 2.6.1 MIC结果判定 当阳性对照孔内细菌明显生长，阴性对照孔未见细菌生长，质控菌MIC在质控范围内时，以无细菌生长孔的最低药物浓度为该药的MIC。当出现单一跳孔时，记录抑制细菌生长的较高药物浓度。如出现多处跳孔，结果无效，需重复试验。 FIC结果判定[] 选择最佳组合效应时各自的MIC甲药联用、MIC乙药联用以计算FIC指数。 FIC指数计算与判读标准： FIC指数≤0.5协同作用；FIC指数0.5～1相加作用；FIC指数1～2无关作用；FIC指数2拮抗作用。 3．