层黏素受体靶向RNA干扰质粒载体的构建.pdfVIP

格床和实验医学杂志 2012年2月 弟11卷 弟3期 ·161 · 层黏素受体靶向RNA干扰质粒载体的构建 高占峰 李天宇 王曙光 (1内蒙古医学院附属医院普外科 内蒙 呼和浩特 010059； 2北京世桥生物制药有限公司 北京 100070； 3第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所 重庆 400038) 摘【要】 目的 构建层黏素受体RNA干扰质粒，为探讨抑制层黏素受体过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用奠定 基础。方法 PCR法获得U6启动子序列以及产生siRNA的相应DNA模板序列，将其克隆入pGenesil一3获得 RNA干 扰载体pGenesil—shLNR。脂质体法将 pGenesil—shLNR导入胆 管癌细胞 QBC939，免疫组化法检测对胆 管癌细胞 QBC939LNR表达的抑制情况。结果 所构建的载体pGenesil—shLNR能够干扰 QBC939细胞中LNR的表达，并且具有 新霉素抗性，能够用G一418筛选稳定转化的细胞株。结论 成功构建了抑制胆管癌细胞QBC939表达LNR的RNA干 扰质粒载体。 【关键词】 层黏素受体 RNA干扰 质粒 载体构建 StudyontheconstructionofLNR —targetingsiRNA —expressingplasmid．GAOZhan一 ng ，LITian—yu ，WANGShu—guang ．1De- partmentofGeneralSurgery，TheAffiliatedHospitalofInnerMongoliaMedcialCollege，HuhehotnInerMongolai010059，China；2Beijaig 函 Bio—PharmaceuticalCo．，Ltd．Beng100070；3Insthu~ofHepatobiliary Surgery ＆SouthwestHospital，ThirdMilitaryMedcialUniversity， Chongqing400038，China ． 【Abstract】 Objective ToconstructLNR—targetingsiRNA—expressingplasmid，andtoexplorethesignificanceofLNRinhibitioninim— muneescapeofeholangiocarcinoma．Methods U6promotercassettena dsiLNR sequencewereobtainedbyPCR techniquenadclonedintopGene— sn-3toproduceplasmidpGenesli—shLNR，whichWastransfectedintoQBC939censwihtlimpofectin2000，nadLNRexpressionWasdetected byimmunohistochemicalmehtod．Results TheplasmidpGenesil—shLNR couldefficientlyreducehteexpressionofLNR andconferG一418re— sistanceOilQBC939cells．Conclusion ThesuccessfulconstructionofsiRNAexpressingplasmidwillfacilitatetheapplicationofRNAinterference techniuq enadlayofundationforfurtherstudiesonhterapeuticeffectofLNR inhibitioninimmuneescapeofcholangiocarcinoma． 【Keywords】 LNR；RNAinterference；Plasmid；Vectorconstruction 细胞跨膜糖蛋 白层黏素受体 (1amininreceptor， 1．2 方法 本研究以质粒 pGenesil一3为骨架进行改 LNR)过表达是恶性实体肿瘤侵袭和转移过程中的共同 造，获得表达 siRNA的质粒载体。 现象，已有研究显示，层黏素(LN)与67kDLNR可以通 1．2．1 引物序列 根据 GenBank中报道的人 LNR序 过增加Fas配体表达诱导T淋巴细胞凋亡_l，2]，致使肿 列，设计引物 (NM_002295．4GI。DNA模 瘤细胞逃避免疫活性