多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞增生的影响.pdfVIP

中华实验眼 盘壹2013年5月第31卷第5期 ChinJExpOphthaimol，May2013，Vo1．31，No．5 · 实验研 究 · 多西环素对体外培养的牛角膜肌成纤维细胞 增生的影响 刘曼丽 邹文进 黄明汉 曾静 付馨余 王松 【摘要】 背景 多西环素是一种金属离子螯合剂和广谱抗生素，常用于眼表疾病的治疗。 目的 研究 多西环素对体外培养 的牛角膜肌成纤维细胞增生 的影响，并探讨其作用机制 。 方法 收集6只新鲜牛角膜 ， 分别用基础培养液配制的 1．0g／L及 2．0g／LI型胶原酶对牛角膜基质层进行二步法消化分离，制成细胞悬液 后转入培养瓶 中用 RPMI一1640培养液(含质量分数 10％胎牛血清)进行培养 。取生长 良好 的细胞进行波形蛋 白免疫细胞化学染色 以确定所培养 的细胞来 自角膜基质层 ，在细胞传代培养 的同时进行 a一平滑肌肌动蛋 白 (d—SMA)免疫荧光细胞化学染色，呈阳性表现 的细胞为角膜肌成纤维细胞 。细胞培养 36h后培养液 中不加 入任何药物者为阴性对照组，阳性对照组细胞培养液 中加入 120mg／L地塞米松 ，另分别在培养液 中加入 1O、 20、40、6O、80mg／L多西环素作为药物干预组 。采用 MTT比色法、流式细胞术{贝0定各组干预24h和 48h后角 膜肌成纤维细胞 的增生情况及细胞周期各时相 的分布 。 结果 体外分离培养 的牛角膜肌成纤维细胞生长 良好 ，免疫组织化学染色显示波形蛋 白和 —SMA呈阳性反应 ，证实为角膜肌成纤维细胞。MTT比色法检测显 示 ，随着多西环素质量浓度 的增加 ，活性角膜肌成纤维细胞 的数量逐渐下降，差异有统计学意义 (F = 1233．778，PO．001)；随着药物作用时间的延长 ，活性角膜肌成纤维细胞的数量逐渐下降，差异有统计学意义 (F叶伺=227．564，P0．001)；且两因素间的交互效应亦有统计学意义 (F ． =51．656，PO．001)。流式细胞 术细胞周期分析显示 ，10、2O、40、60、80mg／L多西环素作用 24h，G。-G 期角膜肌成纤维细胞率分别为 82．85％、84．36％、85．18％、87．12％、89．31％，明显高于阴性对照组的63．89％，差异均有统计学意义 (P 0．05)，40mg／L多西环素组 G。一G期角膜肌成纤维细胞率接近阳性对照组 ；10、20、40、60、80mg／L多西环素作 用 48h，G。一G期角膜肌成纤维细胞率分别为 82．78％、86．15％、88．23％ 、89．57％、93．00％，明显高于阴性对 照组的7O．17％，差异均有统计学意义 (P0．01)，而40mg／L多西环素组 G。一G期角膜肌成纤维细胞百分数接 近 阳性对照组 。 结论 在 l0～80mg／L质量浓度时，多西环素 以剂量一时间效应依赖 的方式抑制体外培养牛 角膜肌成纤维细胞的增生 ，40mg／L多西环素与 120mg／L地塞米松具有相当的作用效果 。 【关键词】 角膜肌成纤维细胞；细胞增生；多西环素 Effectofdoxycyclineontheproliferationofbovinecornealmyofibr0blastinvitro LIUMan—li，ZOUWen-fin， HUANGMing—han，ZENGring，，f／Xin-yu，WANGSong．DepartmentofOphthalmology，FirstAffiliatedHospital， GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China Correpondingauthor：ZOUWen-fin，Email：bigstone168@163．corn 【Abstract】 Background Doxycyclineisabroadspectrum antibiotic，anditis~equentlyusedinthe treatmentofocularsurfacediseases． Objective Thepurposeofthepresentstudywastoinvestigatetheeffectof doxycyclineontheinhibitionofcellproliferat