发酵产生5-氨基乙酰丙酸的科氏葡萄球菌的筛选1.docxVIP

发酵产生5-氨基乙酰丙酸的科氏葡萄球菌的筛选张龙涛1，李昂3，曹宜2，朱育菁2，缪伏荣1，冯玉兰*1，刘波*2（福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州，350013；2. 福建省农业科学院农业生物资源研究所，福州，350003；3.中国石油天然气第七建设公司，胶州，266300）摘要：筛选得到一株可生产5-氨基乙酰丙酸（ALA）的细菌LA-10，21 h摇瓶发酵ALA产量达6.88 mg.L-1。在常规生理生化特性测定基础上，结合16S rDNA序列分析鉴定为科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii），命名为科氏葡萄球菌LA-10。关键词：5-氨基乙酰丙酸；科氏葡萄球菌；筛选；发酵 Screening of Staphylococcus cohnii for bioproduction of 5-aminolevulinic acidZHANG Long-Tao1，LI Ang3，CAO Yi2，ZHU Yu-jing2，MIAO Fu-rong1，FENG Yu-lan*1， LIU Bo*2( 1. Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine，Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou, 350013; 2. Agricultural Bio-Resource Research Institute，Fujian Academy of Agricultural Sciences，Fuzhou，350003; 3. China Petroleum 7th Construction Company, Jiaozhou, 266300, China )Abstract: A strain numbered as LA-10 producing 5-aminolevulinic acid was screened from the stroma cushion of piggery. The strain was identified as Staphylococcus cohnii based on the morphous, biological, biochemical characteristics, and 16S rDNA analysis. It was named Staphylococcus cohnii LA-10. Keywords: 5-aminolevulinic acid；Staphylococcus cohnii；screening；fermentation前言5-氨基乙酰丙酸（5-aminolevulinic acid，简写ALA，下同）是生物体内合成四吡咯化合物（卟啉、叶绿素、血红素和维生素B12）生物合成的前体物质，是生物调节合成四吡咯物质的关键中间物，广泛存在于微生物、植物和动物细胞中[1]。ALA主要用于作为一种环境无残留的除草剂[2]和杀虫剂[3]、植物生长促进剂[4]及作为第二代光动力学药物用于治疗癌症和其他疾病[5,6]。目前ALA的主要使用化学法合成，其具有合成步骤繁琐、副产物毒性大、得率较低等突出问题[7]。微生物合成ALA工艺简单，产率高，具有工业化生产的潜力，因此近年来受到了广泛关注。用微生物法制备ALA的的研究已经有20余年的历史，但迄今为止，仅有为数不多的几种微生物被发现具有生物法制备ALA的功能，包括Rhodobacter sphaeroides[8]、Rhodovulum sp.[9]、Rhodopseudomonas palustris[10]、Propionibacterium acidipropionici [11]、Chlorella sp.[12]、Chlorella regularis [13] 和基因工程菌[14,15,16,17,18,19,20]。因此筛选新的微生物菌种进行生物法制备ALA成为研究者的新任务。本文尝试从自然界筛选可产ALA的细菌，为进一步研究生物法制备ALA提供新材料，开拓新途径。1 材料与方法1.1 土壤样品采集30份土壤样品2008年9-10月采自福州各地池塘淤泥、猪舍垫料等。1.2 培养基分离培养基（g.L-1）：酵母浸膏5，胰蛋白胨10，NaCl 5，琼脂1.8；初始pH值6.0；50 ug.mL-1制霉菌素。保存培养基（g.L-1）：胰蛋白胨10、酵母浸膏4、葡萄糖2、硫酸镁1、磷酸氢二钠1、琼脂1.8。发酵培养基（g.L-1）：葡萄糖5、酵母浸膏3、氯化钠1、磷酸氢二钠1、磷酸二氢钠1、硫酸镁1、初始pH值6.0。1.3 主要试剂ALA盐酸盐标准品（97%，sigma公司），其余试剂均为分析纯。1.