核酸提取纯化常见问题解答.docVIP

核酸提取纯化 常见问题解答 　 1.AccuPrep?凝胶回收试剂盒常见问题2.AccuPrep?基因组DNA提取试剂盒常见问题3.AccuPrep? GMO提取试剂盒常见问题4.AccuPrep? PCR纯化试剂盒常见问题5.AccuPrep?质粒提取试剂盒常见问题6.AccuPrep?粪便DNA提取试剂盒常见问题7.AccuPrep?病毒RNA提取试剂盒常见问题 8.琼脂糖凝胶回收和PCR纯化常见问题9.质粒DNA提取操作常见问题　 　 AccuPrep?凝胶回收试剂盒????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? ↑TOP Q1. 产量低A1. 1）凝胶不完全溶化会导致DNA产量的降低。离液盐不足不仅会导致凝胶溶化不完全，DNA被包裹不???????????? 能释放到溶液中，而且还降低柱子对DNA的亲和力，最终导致DNA产量降低。?????? 2）加入等量的无水乙醇到W缓冲液中了吗? 过浓的W缓冲液会将DNA洗脱，从而导致产量的降低。?????? 3）错误的洗脱缓冲液会降低产量. 洗脱缓冲也不能包含过多的盐. 缓冲液的 pH 应调至7.0-8.5。?????? 4）错误的结合条件例如pH过高会导致产量的降低GB缓冲液含有pH指示剂，当颜色为黄色时表示pH???????????? 在正常范围内。如果颜色为红色或橘黄色，表示pH已经超出了正常的范围。这时应该加入几滴醋???????????? 酸钠溶液去调整pH值到正常范围内。?????? 5）放入了过多的琼脂糖凝胶块。如果放入了超过400mg的琼脂糖凝胶块可能会降低DNA结合柱的吸???????????? 附力，从而导致DNA产量的降低。 Q2．琼脂糖凝胶样品悬浮在溶液中 A2. 琼脂糖凝胶样品悬浮在溶液中，这可能是因为样品中含有WB缓冲液。WB缓冲液中的乙醇会导致悬浮，这种情况下离心样品三次。如果悬浮的状况依然存在，那么打开盖子空气中放置10分钟挥发乙醇，再离心一次。 Q3．提纯后的后续酶反应效率降低A3. 1)样品中高浓度的盐抑制了酶的活性。这种情况下，加入W缓冲液到结合柱后放置结合柱5分钟，然后再离心。2)样品中含有残留的WB缓冲液，残留的乙醇会抑制后续的酶反应，结合柱必须要完全晾干。如果问题仍然存在, 第二次离心后让结合柱晾干10分钟。3）一起被洗脱的玻璃纤维影响了酶的活性，再离心1分钟，转移上清液到一个新的离心管 中。 　 AccuPrep? 基因组DNA提取试剂盒??????????????????????????????????????????????????????????????????????? ↑TOP 　 Q1. DNA产量或纯度低 A1. 1）缓冲液或其他试剂暴露在不合适的条件下，导致了效率降低。 ??????????? 确保试剂到货后存放于室温(15-25)，试剂使用后瓶盖要拧紧，保持其pH值及稳定性，避免污???????? 染。冻干试剂溶解后应分装并于–20保存。 ?????? 2）在洗涤缓冲液1和2中没有加入无水乙醇。 ???????????? 加入乙醇后，充分混匀洗涤缓冲液W1和W2，并且作标记，表明乙醇己加入。 ?????? 3）试剂和样本没有充分混匀。 ???????????? 每次样本管中加入试剂后都需要及时混匀。 ?????? 4）您可能没有选用适合的试剂来洗脱DNA。 ???????????? 洗脱DNA需要碱性条件，使用试剂盒中提供的洗脱缓冲液进行洗脱。 ?????? 5）裂解可能不完全。 ???????????? 确保裂解液从混浊变的澄清，表明蛋白质已经降解。根据组织类型不同需要的裂解时间会有差????????? 异。裂解通常需要1-3小时， 为保证其效率，可以使用振荡水浴的方法（如实验操作中所述）。????????? 样品中加入蛋白酶Ｋ后要立即混匀。裂解液加入结合柱前将样品与异丙醇充分混匀。 ?????? 6）从组织中提取的产量低。 ???????????? 在进行消化与裂解步骤之前确保组织破碎为小块（或粉末状），以下两步增加了与蛋白酶Ｋ一起???????? ?孵育的时间：A 将组织与蛋白酶Ｋ孵育过夜。 B. 将组织与蛋白酶Ｋ孵育3 ~ 4小时，然后加入新????????? 鲜的蛋白酶Ｋ30 μl再孵育1 ~ 2小时。 ???? 7）产物在260nm处的吸光值(A260)太高。 ??????????? 结合柱中的玻璃纤维可能与核酸一同被洗脱下来。这些纤维可以将光散射，造成了较高的吸光值???????? 读数。在最后的洗脱阶段，太多的离心也可能导致将结合柱中的玻