NY_T 1332-2007 乳与乳制品中5一羟甲基糠醛含量的测定 高效液相色谱法.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 1332－2007 乳与乳制品中5一羟甲基糠醛含量的测定 高效液相色谱法 Milk and Dairy Products—Determination of 5-hydroxymethylfurfural by HPLC 2007-04-17 发布 2007-07-01 实施  前 言 本标准中附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部食品质量监督检验测试中心(上海)。本标准主要起草人：孟瑾、郑冠树、韩奕奕、吴榕、韩惠雯。 本标准规定了乳与乳制品中5羟甲基糠醛(5F)含量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于乳与乳制品中5羟甲基糠醛(5HMF)含量的测定。 本方法检出限为0.005 mg／kg。 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法乳与乳制品中蛋白质经沉淀除去，滤液中的5羟甲基糠醛(5HMF)经反相高效液相色谱柱分离，以紫外检测器检测，外标法定量。除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水：GB／T 6682规定的一级水。甲醇(CH30H)：色谱纯。草酸溶液{c[(COON)2]=0.15 mol／L}：准确称取1.893 0 g草酸[(COOH)2·2H20]，溶解并稀释至100 mL。亚铁氰化钾溶液：92 g／L，准确称取亚铁氰[K4Fe(CN)6·3H20]106.0 g，溶解并稀释至1000 mL。乙酸锌溶液：183 g／L，准确称取219.0 g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H20]，溶解并稀释至1000 mL。准确称取质量分数不低于99.0％的5一羟甲基糠醛标准物质0.03 g，充分溶解于10 mL甲醇(4.2)后，用水(4.1)稀释定容至100mL，混合均匀。该溶液每毫升含5羟甲基糠醛标准物质0.3mg。冷藏于冰箱中90 d。准确吸取标准贮备液(4.6.1)1.0 mL，用水(4.1)稀释定容至100 mL，混合均匀。该溶液每毫升含5羟甲基糠醛标准物质3.0 g。冷藏于冰箱中，有效期14 d。定量滤纸：中速，直径约15 cm。滤膜：水相，0.45m。 常用实验室仪器及以下各项。分析天平：感量0.0001 g。高效液相色谱仪：配有紫外检测器。贮藏在冰箱中的待测试样，应在试验前预先取出，并达室温。准确称取试样10 g，精确至0.0001 g。置于具塞试管中，待测。准确称取试样1 g，精确至0.0001 g。置于具塞试管中，乳粉加入约7.3 mL 25左右的温水(4.1)，振摇溶解；干酪加入30 mL温水(4.1)，匀浆试样(6.1.1)中加入5 mL草酸溶液(4.3)，混合均匀，沸水浴中加热25 min，冷却至室温。将试样(6.1.2)转移至50 mL容量瓶中，用约10 mL甲醇(4.2)分次淋洗，使完全转移。加入3 mL亚铁氰化钾溶液(4.4)和3 mL乙酸锌溶液(4.5)，剧烈振摇后静置15 in。用甲醇(4.2)定容、混匀，冷却至室温。中速定量滤纸(4.7)过滤，弃去最初的滤液，收集滤液于烧杯中，用滤膜(4.8)过滤，用于高效液相色谱仪(5.2)测定。色谱柱：C18，250×4.6 mm，5m。 流动相：甲醇+水(15+85)。 流速：1.0mL／min。 检测波长：280 m。 柱温：室温。 进样体积：10L。准确吸取各不少于2份的10L标准工作液(4.6.2)和10L试液(6.1.3)，分别进样，得到标准工作液和试液中5羟甲基糠醛的峰面积，外标法定量。典型色谱图参见附录A中的图A.1。以水(4.1)代替待测样品，按6.2.2步骤同时完成空白试验。试样中5羟甲基糠醛的含量按式(1)计算： =——×cs ×——…………………………………………(1) As m 式中： ——试样中5羟甲基糠醛的含量，单位为毫克每千克(mg／kg)； Ai——试样中5羟甲基糠醛的峰面积； A——标准工作液中5羟甲基糠醛的峰面积； ——标准工作液中5羟甲基糠醛的浓度，单位为微克每毫升(g／mL)； ——试样最终定容体积，单位为毫升(mL)； m——试样质量，单位为克(g)。计算结果用平行测