CD8α+树突状细胞特异性基因PCNP的克隆鉴定及作用.pdfVIP

Cloning, identification of specificity genes PCNP and their function in the CD8α+ dendritic cells A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Degree of Master of Science By Zhen Wan Supervisor: A.P. Xinying Ji June, 2013 摘 要 背 景 树突状细胞（ Dendritic cells DC ）是目前所知体内功能最强的专职抗原递呈细胞 （Antigen presenting cells APC ），也是目前发现的唯一能激活未致敏性T 细胞的专职抗 原递呈细胞。它能高效地摄取，加工处理和递呈抗原，未成熟DC 具有较强的迁移能力 ， 而成熟的DC 能有效激活初始型T 细胞，是启动，调控，并维持免疫应答的中心环节。 成熟DC 能表达高水平的抗原递呈分子（MHC-I 和MHC-II ）,共刺激因子（CD40,CD80 和CD86 ），自身也具有高分泌IL-12 的能力。DC 与肿瘤的发生，发展有着密切的关系， 有效的抗肿瘤免疫反应的核心是产生以CD8+T 细胞为主体的细胞免疫应答，是DC 作 为免疫治疗手段的基础。 小鼠淋巴组织中 CD8α 树突状细胞含有至少三种不同的亚型： CD8+CD4-,CD8-CD4-,CD8-CD4+ 。其中表达CD8α 表面分子的亚型称为 CD8α+树突状 细胞（简称8+DC ），反之称为CD8α-树突状细胞（简称8-DC ）。8+DC 主要存在于动脉 周围淋巴鞘中（PALS ），而8-DC 则存在其边缘区域。这两类亚型都含有CD11c，MHC-I， MHC-II ；其中 8+DC 的表面抗原含有 DEC-205 ，CD8α ，CD103 ；8-DC 的表现型为 CD11b+CD8α-DEC-205-CD4+Mac-1+ 。8+DC 与其相邻的8-DC 相比有多个主要功能上 的区别：①它们能有效地将外源细胞产生的抗原和可溶性抗原交叉递呈给主要组织相容 性复合体 I （MHC-I ）；②激活后它们是白细胞介素-12 IL-12 的主要产生细胞，进而刺 激炎症反应；③在细胞内病原体感染时，它们成为主要的病原体抗原递呈者，促进针对 入侵病原体的 CD8+T 细胞反应；④在稳定状态，它们具有免疫调节性能，并帮助维持 对自身组织的免疫耐受；⑤8+DC 可诱导特异性细胞毒性T 淋巴细胞（CTL ）的生成而 8-DC 则不可以， CD8 CLT 则在抗肿瘤，HIV/AIDS 等方面起到重要的作用。所以小鼠 8+DC 是调节T 细胞反应的重要角色，但存在的问题是无法在人体内找到其对应的细胞。 法国科学家2010 年报道，表达DNGR-1 CLEC9A 和高表达BDCA3 分子的人脾脏DC 在表型与功能方面与小鼠8+DC 相似（DNGR-1BDCA3hiDCs）。而且该细胞可以在体外 增殖，这为8+DC 的免疫治疗打开了一扇门。 为探索 8+DC 与 8-DC 在表达功能区域的差异基因有哪些。通过减数抑制杂交技术 （Suppressive subtractive hybridization; SSH ）筛选这两种亚型的优先表现型基因。SSH I 法能够通过特殊的专利技术，首先消除掉8+DC 细胞上与8-DC 相同的基因，富集8+DC 特异基因，建立一个包含有 8+DC 全