NY_T 918-2004 饲料中雌二醇的测定 高效液相色谱法.docVIP

饲料中雌二醇的测定 高效液相色谱法 Determination of estradiol in feed —High—pressure liquid chromatography 2005-01-04 发布 2005-02-01 实施  前 言 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：农业部饲料质量监督检验测试中心(沈阳)、国家饲料质量监督检验中心(北京)。 本标准起草人：张建勋、曹东、董永亮、苏晓欧、田颖、李雪兰、孟庆文、李永才、田晓玲。 饲料中雌二醇的测定 高效液相色谱法 范围 本标准规定了以高效液相色谱仪(HPLC)测定饲料中雌二醇含量的方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混料中雌二醇含量的测定,本方法检测限为1 mg/ kg。 规范性引用文件 下列文件的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 6682—1992分析实验室用水规则和试验方法 GB／T 14699.1 饲料采样方法 原理 用甲醇提取饲料中的雌二醇,取部分提取液过C18萃取柱，用水淋洗杂质,乙腈洗脱,以乙腈+水(40+60)为流动相，用高效液相色谱仪于280 mm处检测。 试剂和溶液 除特殊注明外,本法所用试剂均为分析纯。 水应符合GB/T 6682—1992一级水规定。 乙腈 色谱纯。 甲醇 雌二醇标准液 雌二醇标准贮备液:准确称取雌二醇(纯度≥98％)0.0250 g,置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解、定容，其浓度为250μg/mL的贮备液，置4℃冰箱中保存。 雌二醇标准工作液:分别准确吸取一定量的标准贮备液(4.3.1),置于容量瓶中,用甲醇稀释、定容,配成浓度为2.5μg/mL,5.0μg/mL,10.0μg/mL,12.5μg/mL,15.0μg/mL,20.0μg/mL,25.0μg/ mL的标准工作液。 仪器和设备 高效液相色谱仪 紫外检测器。 分析天平 感量为0.000 1 g。 天平 感量为0.001 g。 震荡器 玻璃具塞三角瓶 250 mL。 C18萃取柱 250 mg／mL。 微孔滤膜 孔径0.45μm。 试样制备 按照GB/T 14699.1方法采样,选取样品至少500 g，四分法缩减至约200 g,粉碎后过1 mm孔筛,备用。 测定步骤 提取与净化 a) 准确称取10 g试样(精确至0.000 1 g),置于250 mL玻璃具塞三角瓶中(5.5),准确加入50 mL 甲醇(4.2)，震荡30 min； b) C18萃取柱使用前处理：加5 mL甲醇，流完后加5 mL水洗，不要挤干，则可以加样液； c) 甲醇提取液过滤，取滤液1 mL～2 mL,加3 mL水混合后,过C18萃取柱(流速1mL/min)，用3 mL水淋洗后，用1 mL乙腈(4.1)洗脱，洗脱液供高效液相色谱分析。 HPLC色谱条件 色谱柱：C18柱，柱长200 mm，内径4.6 mm，粒径5μm。 流动相：乙腈(4.1)十水(40+60)。 流动相流速：1.0 mL／min。 检测波长：280 nm。 进样体积：20μL。 HPLC定量测定 取标准工作液(4.3.2)作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量。 结果计算与表述 试样中雌二醇的含量按式(1)计算： X= ×n……………………………………………(1) 式中： X——试样中雌二醇的含量，单位为毫克每千克(mg／kg)； m1——试样色谱峰对应的雌二醇的质量，单位为微克(μg)； m——试样质量，单位为克(g)； n——稀释倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位。 重复性 同一操作者对同一试样平行测定结果的相对偏差不大于10％。 NY/T 875－2004 ICS 65.150 B 54 SC 中华人民共和国农业行业标准 SC/T 2031－2004 2 3 ICS 65.120 B46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T 918－2004 中华人民共和国农业部