重构酿酒酵母N-糖基化途径生产人源化糖蛋白.pdfVIP

Ｒesearch Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 54 (5 ):509 － 5 16 ;4 May 20 14 ISSN 000 1 － 6209 ;CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi :10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 14 . 05. 005 N- 重构酿酒酵母 糖基化途径生产人源化糖蛋白 1 ，2 1 ，2 1 1 ，2 1 ，2 * ， ， ， ， 贺铁凡 徐沙 张阁元 中西秀树 高晓冬 1 2 ， ， ， 2 14 122 江南大学 生物工程学院糖生物学与生物技术教育部重点实验室 食品科学与技术国家重点实验室 江苏无锡 :【 】 (Saccharomyces cerevisiae) ， N - 摘要 目的 为了在酿酒酵母 中生产人源化的糖蛋白 必须对 糖基化途径进行 。 N - ， 基因工程改造 作者通过敲除一些酵母 糖基化途径中的特异性糖基转移酶 得到一株可以用于继续表达 人类糖基转移酶的重组菌， 。【 】 并通过生长适应性进化技术回复其细胞生长能力 方法 首先运用酵母遗传学 -1 ，3 - (AL G3 )、 -1 ，6 - 和分子生物学技术敲除酿酒酵母的 α 甘露糖基转移酶基因 α 甘露糖基转移酶基因 (OCH 1) -1 ，3 - (MNN 1)。 (invertase) N - 和 α 甘露糖基转移酶基因 采用蔗糖酶 活性染色实验初步检测 糖链的 ， 。 变化 然后通过高效液相色谱和甘露糖苷酶酶切实验对其糖链结构进行鉴定 重组菌通过在高温条件下进 ， 。【 】 alg3 och 1 mnn 1 行生长适应性进化 筛选出生长能力回复突变的菌株 结果与结论 构建了Δ Δ Δ 菌株得到人 Man GlcNAc ， 类糖基化中间体 5 2 并对上述三缺陷型菌株进行适应性进化提高其细胞生长能力和环境适应能 。 ， ， Man GlcNAc 。 -1 ，2 - ， 力 此外 作者还发现 该重组菌存在少量