共振光散射技术在核酸分析中应用及稀土共发光效应研究.pdf

摘 要 核酸是生命现象的物质基础，它是遗传信息的载体，是生物物种延续、物种 进化的决定因素。深入研究小分子物质与棱酸的作用，建立核酸快速简便的分 析方法，对分子水平上阐明生命的奥秘、薪测药物的开发、攻克许多疑难瘸痘 以及促进信息科学的发展都具有重要的意义，是当前生物分析化学研究的前沿 和热患。 稀土元索在地质学发光材料生命科学等众多领域具有重蹑用途，而荧光分 析法怒测定痕量稀土元素的手段之一。特裂跫耩土共发光效应的发现捷褥荧光 强度进～步增强。因此寻找新型的共发光体系对于撮高荧光分析法的灵敏度和 选择健，对于研究发光梳理其有重大意义。 本文主要利用光散射技术及吸收光谱技术等手段研究了小分子与核酸的相 互作掰，同时发现了～个以嚎喏酮药物为配体的新的稀土元潦共发光体系，建 立7核酸以及稀土元索铕的快速、准确、楚攫、灵敏戆分毫睡方法。本文静绪论 部分评述了核酸发光探针以及稀土元素荧光分析的基本原理、研究进展和发展 趋势。 本论文共分为三部分： l。阚译酚紫一溴代十六烷基啦啶一核酸共振光散射体系的研究及核酸的测定 建立了在溴代十六烷基毗嚏(cPB)存在下，用间甲酚紫(CP)为共振光散射 探针测定核酸豹新方法。在六次甲基四胺(HMTA)一HCI缓冲溶液(pH=4．5) 中，DNA的加入往CP—CPB体系鲍共振光教瓣(RLS)增强，最大散射峰位于 550nm，此RLS信号匈DNA浓度在一定范嗣内成正比。在最佳实骏条件下， 5．OX ng／ml。该方法已用于☆成样品的 i0一g／ml，检出限分别为lOng／m1和26 溺定，其结暴令人满意。 2．冈4果红一CT姒B一核酸共振光散射体系的研究及分析应用 建立了在阳离予表面活能荆CTMAB存在下，用刚果红(cR)为探针测定核酸 系的共振光散射(RLS)增强，最大散射峰位于560nm，此RLS信号与核酸的浓 度在一定范围内成正比。在最佳实验条件下，fsDNA、ctDNA和yRNA的线性范 围分别为1．0Xi01～1．0×1019／ml、7，5X104～1．0Xi0。6g／ml和7．5X10～～ 2．5×101 g／ml，检出限分别为0．019ng／ml、0．89ng／ml和1．2ng／ml。该方法 己用于合成样品的测定，其结果令人满意。同时初步探讨了体系共振光散射增 强的机理。 3．Gd3+对Eu一恶喹酸一CTMAB体系荧光增强效应的研究及分析应用 研究了G矿对Eu—oxolinicacid(恶喹酸)-CTMAB体系的荧光增强效应。在 pH=7．25的条件下，G矿的加入可使体系的荧光强度大大增强。在最佳实验条件 mol／l，检出限为5．2Xi012mol／l。采用多点增量标准加入法测定混合稀土样品 中的痕量Eu3“结果满意。同时初步探讨了荧光增强效应的机理。 本论文的主要特点是： 1．利用表面活性剂协同增强核酸和染料体系的共振光散射强度，建立了分 别以三苯甲烷类染料和偶氮类阴离子染料为共振光散射探针的体系，并应用于 核酸的定量测定中。方法的灵敏度高，1检出限低。 (1)单纯的三苯甲烷染料间甲酚紫与核酸的作用很弱，体系的共振光散射 强度很小，但加入CPB后体系的共振光散射强度大大增强，说明CPB可协同增 强体系的共振光散射强度，并将此现象应用于核酸的测定中。 (2)在已报道的核酸共振光散射体系中，其探针大多为阳离子染料，而应 用阴离子染料作探针的却很少。本论文首次以偶氮类阴离子染料刚果红为探 针，通过加入CTMAB实现了阴离子染料与核酸之间的相互作用，并将此现象应 用于核酸的测定中，此方法灵敏度很高，检出限可达到10119／ml，是目前测定 核酸的最灵敏的方法之一。 2．发现了～个新的稀土元素的共发光体系。此体系以非B一二酮类的化合 物恶喹酸为配体，稀土元素G矿的存在可使Eu一恶喹酸一CTMAB体系的荧光强度 显著增强。此体系具有线性范围宽，检出限低的特点。 关键词：共振光散射核酸稀土元素共发光效应 Abstract baseof1ife。Itisthecarrierof isthematerial acid Nucl