NOD样受体通路在急性腹腔感染早期对大鼠肠屏障的作用机.pdfVIP

中华危重病急救医学 2013 年 9 月第 25 卷第 9 期 ChinCritCareMed ，September2013 ，Vol.25 ，No.9 ·527 · ·论著· NOD 样受体通路在急性腹腔感染早期对 大鼠肠屏障的作用机制初探 肖元廷 李国逊 王西墨 【摘要】 目的 初步探讨在急性腹腔感染早期肠上皮细胞 NOD 样受体（NLRs ）的表达规律及其对肠屏 n ＝6）和实验组（n ＝24），采用盲肠结扎穿孔术（CLP ） 障的作用。 方法 将 SD 大鼠按随机数字表法分为对照组（ 制备急性腹腔感染模型。 于术后 2、6、12 和 24h 各取 6 只大鼠，采用实时荧光半定量聚合酶链反应（RT-PCR ） 检测末端回肠黏膜上 NOD2、NOD 样受体 3（NLRP3 ）的mRNA 表达；蛋白质免疫印迹试验检测天冬氨酸特异性 半胱氨酸蛋白酶 1（caspase-1 ）及紧密连接蛋白的表达；凝胶电泳迁移率（EMSA ）实验检测核转录因子 -资B （NF-资B ）活性；酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测血清白细胞介素-6（IL-6 ）和肿瘤坏死因子-琢（TNF-琢 ）的水平； 原位末端缺刻标记试验（TUNEL ）观察肠上皮细胞死亡情况，并用异硫氰酸荧光素（FITC ）标记的葡聚糖溶液检 测肠道的通透性。 结果 NOD2mRNA 表达在术后 2h 迅速升高达峰值，且明显高于对照组（75.50±13.03 比 P ＜0.01），术后6h 迅速回落，此后缓慢下降；NLRP3mRNA 表达于术后 2h 降低，随后逐渐升高至 1.00±0.00， P ＜0.05）；caspase-1 蛋白表达在术后 2h 即明显高 12h 达峰值，且明显高于对照组（4.03±0.71 比 1.00±0.00， P ＜0.01）， 然后呈逐渐增高的趋势； 紧密连接蛋白Occludin、 ZO-1 和 于对照组 （3.56±0.14 比 2.10±0.11 ， Claudin-4 的表达分别在术后 2～6h 即明显低于对照组 （2hOccludin ：7.24±1.13 比 12.72±1.34， 6hZO-1 ： P ＜0.05 或 P ＜0.01）， 随后均逐渐下降； 0.47±0.09 比 1.57±0.17，2hClaudin-4 ：1.63±0.28 比 3.40±0.34 ， P ＜0.01）,随后在一个高表达状态下呈 NF-κB 活性在术后 2h 即明显高于对照组（24.85±0.57 比 12.42±0.73， P ＜0.01），随 缓慢下降趋势；IL-6 在术后 6h 急剧增高达峰值 （与对照组比较 3088.07±330.03 比 26.19±7.58 ， P ＜0.01），最后呈逐渐增高的 后缓慢回落；TNF-α 于术后 2h 即明显高于对照组（110.75±19.18 比 7.86±3.58 ， 趋势； 随着 CLP 后时间的延续， 肠上皮细胞死亡率在术后 2h 即明显高于对照组 〔（0.12±0.02 ）% 比 （0.03± P ＜0.05〕，并呈逐渐上升的趋势；肠道通透性随着腹腔感染时间的延长而