树突状细胞疫苗的制备及其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞对宫颈癌CaSki细胞的杀伤作用.pdfVIP

106 肿瘤2011年2月第31卷第2期 Tumor Vol. 31, February, 2011 DOI:10.3781/j.issn.1000-7431.2011.02.003 Basic Research 基础研究 · 树突状细胞疫苗的制备及其体外诱导细胞毒性T淋巴细胞对宫颈癌 CaSki细胞的杀伤作用 昉1, 2 1, 3 1, 2 1, 3 1, 2 1, 3 1, 3 1, 3 焦庆 ，易发平 ，陈 全 ，兰 欢 ，艾 青 ，符少月 ，俞 垚 ，宋方洲 重庆医科大学 1. 分子医学与肿瘤研究中心；2. 免疫学教研室；3. 生物化学与分子生物学教研室 重庆 400016 [摘要] 目的： 制备树突状细胞（dendritic cells，DCs）疫苗并观察其在体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs)对宫颈癌CaSki细胞的杀伤效应。方法：分离培养小鼠未成熟DCs，FCM检测小鼠未成熟DCs表 面标志物CD40、CD86、主要组织相容性复合体-Ⅱ（major histocompatibility complex-Ⅱ，MHC-Ⅱ） 和 CD11c； 将已成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus, HPV) 16 E6E7基因的重组腺病毒pAd-E6E7感染体外培养 的小鼠未成熟DCs，提取CaSki细胞裂解物负载DCs，制备DC疫苗，激光共聚焦显微镜下观察pAd-E6E7感染的小鼠 未成熟DCs绿色荧光蛋白表达，Western印迹法检测E6蛋白的表达；DCs疫苗诱导产生CTLs后与CaSki细胞共培养， CCK8（cell counting kit8）法检测其对CaSki细胞的杀伤效应。结果：成功分离培养了小鼠未成熟DCs，并制备获得 了HPV16E6E7特异性DCs疫苗。DCs疫苗诱导产生的CTLs对CaSki细胞具有杀伤作用，pAd-E6E7感染组对CaSki的 杀伤效应明显高于CaSki细胞裂解物负载组及未处理DCs组（P ＜0.05）。结论： 以携带HPV 16E6E 7基因的重组腺病 毒感染DCs制备基因修饰的DCs疫苗，具有诱导CTLs体外杀伤子宫颈癌CaSki细胞的作用。 [关键词] 宫颈癌；疫苗，合成；人乳头瘤病毒；T淋巴细胞，细胞毒性；树突状细胞；CaSki细胞 [中图分类号] R737.33 [文献标志码] A [文章编号] 1000-7431（2011）02-0106-05 Induction of cytotoxic T lymphocytes against cervical cancer cell line CaSki using therapeutic dendritic cell vaccine JIAO Qing-fang 1, 2, YI Fa-ping1, 3, CHEN Quan1, 2, LAN Huan1, 3, AI Qing1, 2, FU Shao-yue1, 3, YU Yao1, 3, SONG Fang-zhou1, 3 1. Molecular Medicine and Cancer Research Center; 2. Department of Immunology; 3. Department of Biochemistry and Molecular Biology, Chongqing Medical University , Chongqing 400016, China [ABSTRACT] Objective: To observe the inductive effect of cytotoxic T lymphocytes (CTLs) against human cervical cancer cell line CaSki