食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定.docVIP

广 州 大 学 综合设计性实验报告 学 院 生命科学学院 課 程 微生物学实验 实验项目 实验八 食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定 实验题目 北亭村饭店饮用水中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定 专 业 生物科学 年级、班别 姓 名 学 号 任课教师 完成日期 2012-12-10 实验八 食品微生物的检测、分离纯化和初步鉴定 —北亭村饭店饮用水中微生物的检测、分离纯化和初步鉴定 【摘要】 目的 通过对北亭饭店饮用水中微生物的检测来提高人们对饮食健康的进一步的认识，加强人们的卫生意识，为了更好地分析饮用水中微生物的含量。 方法 本实验应用平板菌落记数技术测定饮用水中细菌总数和进行生理生化鉴定。由于北亭饭店饮用水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是饮料中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值。本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。所谓细菌总数，指1毫升检样中所含的细菌菌落的总数。还有就是通过V-P反应、糖发酵试验、革兰氏染色以及芽孢染色等初步的鉴定试验来进行检测。 结果 通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为乳糖发酵培养基糖发酵培养基培养基的配制与灭菌。 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对 pH 要求不一样，酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的 pH 一般为中性或微碱性 ( 嗜碱细菌和嗜酸细菌例外 ) 。所以配制培养基时都要根据不同微生物的要求将培养基的 pH 调到合适的范围。由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌，如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。微生物的分离与纯化 自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。从中分离多菌株实验将采用。 分离菌株的鉴定 微生物的分类鉴定是微生物的重要内容，一般从菌落特征、细菌特点生理生化等方面进行鉴定。各种细菌在代谢类型上表现了很大的差异。不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和的能力不同。这些都反映了它们是有不同的酶系统。细菌的这种生化反应的多样性在自然界产生了两种结果：第一、使自然界所有的有机分子都有可能得到分解；第二、使不同细菌之间有了互相作用和互相依赖的基础。另一方面，微生物生化反应是微生物分类鉴定中的重要依据之一细菌的生化反应的多样性也被人们作为细菌的鉴定和分类方法来利用，可以鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。*细菌总数，霉菌和酵母菌总数是反映样品的卫生质量的微生物学指标，是指食品经过处理，在一定条件下培养后（37℃培养24h），所得1g或1ml检样中所含的菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。 实际上，菌落总数并不完全反映样品中实际存在的所有细菌的数量，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 *大肠菌群：一类好氧和兼性厌氧、在乳糖培养基中经37℃、24h-48 h培养产酸产气、G-、无芽孢杆菌, 是常用的粪便污染指示菌，可反映样品污染的可能性和程度。 *检测大肠菌群的方法: 多管发酵法、微孔滤膜法和纸片法。本实验采用快速大肠菌群检测试法。 *大肠菌群检测纸片的原理： （1）滤纸片含营养物质、指示剂以及G+抑制剂；（乳糖，蛋白胨、胆盐、TTC（氯化三苯基四氮唑）、NaCl、K2HPO4、溴甲酚紫） 大肠菌群:琥珀酸脱氢酶 （2）TTC（无色）-----------------------非水溶性的红色三苯甲脂 酸性条件下 （3）溴甲酚紫：-----------黄色 （4）查表：大肠杆菌MPN(Most Probable Numver, 最大机率数) 表,得到数据乘稀释倍数，以此为结果，报告100ml检样内大肠菌群的MPN值。 结果判断说明: 纸片上出现红色斑点, 外周黄晕或纸片产生黄色背景, 并在黄色背景上出现红色斑点或片状黄晕者为阳性; 纸片上呈均