人胸椎黄韧带BMP.DOCVIP

临床医学论文-人胸椎黄韧带BMP ??????????? 作者 顾树明　田纪伟　 徐林　贾连顺 【关键词】? 人胸椎 ??? 摘要：［目的］研究不同年龄组胸黄韧带中BMP2和TGFβ基因表达规律。［方法］利用BMP2和TGFβ cDNA探针，对不同年龄组的黄韧带冰冻切片进行原位杂交，用VIDAS图像分析仪分析。［结果］20岁以下组，有明显的TGFβ表达，无BMP2表达；21~40岁组，黄韧带的附着点处有少量的BMP2和TGFβ阳性表达信号。41~60岁组，在附着点处TGFβ表达较弱，但BMP2表达相对增强。61岁以上组，TGFβ无表达，附着点处有呈簇状BMP2阳性表达信号。VIDAS图像分析显示各组间差异有显著性。［结论］随着年龄的增长，TGFβ表达逐渐减弱，在附着点处出现BMP2的表达。 　　关键词：人胸椎；黄韧带； BMP2和TGFβ; 基因表达 　　Abstract：［Objective］To observe the gene expression of collagen BMP2 (bone morphogenetic protein2) and TGFβ (transforming growth factorβ) in human thoracic ligamentum flavum［Method］BMP2 and TGF13 probes were labeled and in situ hybridization results were analyzed by VIDAS system［Result］(1) Under 20 years group:the positive gene expression of TGFβ was evident,but it was negative to BMP2(2) 21 ~40 years group:there were a few positive signal of both BMP2 and TGFβ on the insertion part(3) 41 ~60 years group:there was only few TGFβ positive signal on insertion part,but BMP2 gene expression was relatively high(4) Over 61 years group:there was not TGFβ expression,but BMP2 expression could only be seen on insertion part and junction part,and was low,but the cells were areatus［Conclusion］In normal ligamentum,there is expression of TGFβ gene,but it decreases with age;with age advancing BMP2 emerges and enhances in the insertion part of ligamentum flavum 　　Key words：Human; Thoracic; Ligamentum;? Flavum; BMP2 and TGFβ; Gene expression 　　在黄韧带中除了弹性纤维以外，主要是Ⅰ型胶原。Ⅰ型胶原抗牵张能力强，在黄韧带中耐受牵拉，并且有一定的预张力，对维持脊柱的稳定有重要作用。Ⅱ型胶原为软骨胶原，在正常的黄韧带中含量极少，文献报道细胞因子BMP2和TGFβ在动物黄韧带退变过程中表达有一定的变化，本文探讨了BMP2和TGFβ基因表达增龄性变化在人胸椎黄韧带退变过程中的意义。 　　1? 材料和方法 　　11? 实验材料 　　111 黄韧带标本 　　21个胸椎黄韧带标本取自椎间盘突出症和椎管狭窄的接受手术病人，正常对照组取自青少年胸椎骨折的病人。术前的影像学检查和术中探查均无韧带骨化，手术取出后立即放入-196 ℃液氮中备用。 　　112? cDNA探针 　　BMP2和TGFβ cDNA探针由中国预防医学科学院劳动卫生研究所刘秉慈教授提供。 　　12? 实验方法 　　121 组织切片、固定 　　组织从液氮中取出后，立即OCT包埋，冰冻切片(切片机以丙酮、乙醇处理)，切片厚度为5 μm。切片置PBS缓冲的4％的多聚甲醛(pH 74)中固定10 min，PBS洗涤2 min×3。37 ℃干燥2 h，密封，置-70 ℃深低温冰箱备用(以上所有试剂均以DEPC处理的双蒸水配制)。 　　122 探针的标记(地高辛随机引物法标记)〔1〕 　　123?? 组织切片上的原位杂交 　　共分5组：2