改变组织醛固酮及其受体表达对SHR大鼠肾脏纤维化的影响.DOCVIP

临床医学论文-改变组织醛固酮及其受体表达对SHR大鼠肾脏纤维化的影响 ??????????????????? ?作者：成彩联， 娄探奇， 汤 颖， 石成钢， 陈珠江?? 【摘要】? 【目的】观察改变肾组织醛固酮及其受体水平对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响。【方法】8周龄的雄性自发性高血压大鼠（SHR） 24只及同源正常京都大鼠（WKY） 8只，SHR分为贝那普利干预组［30 mg/(kg·d)］、大剂量安体舒通干预组［100 mg/(kg·d)］和高血压模型对照组，同时设同源的正常对照组，干预时间为8周，检测收缩压、尿蛋白、血白蛋白、尿素氮、肌酐、肾组织醛固酮受体、TGF-β1的mRNA和蛋白表达。【结果】贝那普利能下调组织醛固酮[（15.8±2.6）vs(22.2±0.6）pg/mg]及其受体水平[(15±4)vs(13±5)PU]并减轻肾脏纤维化［(17.0±1.8)vs(20.0±2.3)PU］，均为P 0.05；大剂量安体舒通能上调组织醛固酮［（24.3±4.6）vs(22.2±0.6）pg/mg］及其受体水平［(16±6)vs(13±5) PU］并加重肾脏纤维化［(22.6±3.0)vs(20.0±2.3)PU］，均为P 0.05。【结论】肾组织醛固酮及其受体水平的改变可能影响高血压肾脏纤维化的过程。 【关键词】? 醛固酮； 醛固酮受体； 调节； 高血压； 肾脏纤维化 高血压主要通过促进动脉硬化形成导致的肾组织缺血性病变及通过肾小球高压力、高灌注、高滤过导致肾脏病变。醛固酮作为肾脏纤维化进程中的一个重要因素，已成为肾脏纤维化研究中的热点之一。醛固酮受体在器官纤维化中的作用也开始受到重视[1]，并有学者尝试改变靶器官中醛固酮受体的表达来影响器官纤维化的进程[2]。但醛固酮受体在器官纤维化中作用的研究多集中在心脏方面，在肾脏领域研究很少。本研究旨在研究改变醛固酮受体表达对肾脏纤维化的影响。 ??? 1?? 材料与方法 ??? 1.1?? 实验对象及分组 ??? 24只8周龄的雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats, SHR），质量200～250 g，购自上海市高血压研究所。SHR分为大剂量安体舒通干预组[100 mg/（kg·d）]；贝那普利干预组[30 mg/（kg·d）]（将药物溶于4 ml饮用水中灌胃）；高血压模型组；同时设同源的正常对照组京都大鼠（WKY）8只，高血压对照组及正常对照组予4 mL饮用水灌胃，干预时间为8周。 ??? 1.2?? 观察指标及检测方法 ??? 1.2.1?? 收缩压?? 大鼠的收缩压采用RBP-1B型大鼠血压计进行测量。 ??? 1.2.2?? 尿蛋白和血生化（白蛋白、尿素氮、肌酐）? ??? 采用OLYPUS AU640全自动生化分析仪检测。 ??? 1.2.3?? 血浆和组织醛固酮含量测定?? ① 取血2 mL，加入肝素20 ?滋L抗凝，3000 r/min离心10 min（r＝20 cm），取上清测血浆醛固酮含量（pg/mL）；②取待测肾组织称重后加入0.5 mol/L的乙酸，100 ℃水浴15 min，冷却后匀浆，12000 r/min离心15 min，取上清液检测组织醛固酮含量（pg/mg）。测试盒由北京北方免疫试剂研究所提供，按试剂说明书操作。 ??? 1.2.4?? 肾小管间质损伤评分?? 切片进行HE染色，参照文献[3]进行评分，200倍光镜下，每张切片随机选择10个不含肾小球的视野。肾小管间质病变由3个参数判定（小管扩张和蛋白管型；炎症细胞浸润；间质纤维化）每个参数按0～3分评定（0＝正常，1＝轻度受损，2＝中度受损，3＝重度受损）。每个样本小管间质的评分为0～9分。 ??? 1.2.5?? 肾小球内胶原沉积?? 切片进行MASSON染色，参照文献[4]进行评分，200倍光镜下，每张切片随机选择肾组织内5个肾小球，利用图像分析系统，首先检测肾小球总面积，再检测相应肾小球内胶原的总OD(光密度)值（蓝色代表胶原纤维），计算胶原纤维OD/肾小球总面积，代表胶原纤维的含量。 ??? 1.2.6?? 肾组织转化生长因子和醛固酮受体mRNA? 采用RT-PCR方法，TRIZOL试剂购于Invitrogen Life Technologies公司，逆转录试剂盒购自晶美生物公司，PCR反应预混液购自宝生物工程（大连）有限公司。取总量为4 ?滋g的总RNA，以Random Primer为引物合成cDNA第一链，以cDNA为模板进行PCR反应。PCR扩增条件：GAPDH（725 bp）：94 ℃ 2 min，94 ℃ 30 s，52 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，72 ℃ 10 min，32个循环；TGF-β1（432 bp）：9