脑肿瘤干细胞增殖与分化细胞生物学研究.pdf

硕七学伊论文 中文摘要 脑肿瘤干细胞增殖与分化的细胞生物学研究 摘要 目的：第一章旨在探讨胶质瘤中脑肿瘤干细胞的细胞生物学特 性，并以人胚胎神经干细胞为对照，观察不同级别胶质瘤BTSC在增殖、 分化等细胞生物学上的差异，为肿瘤干细胞的进一步研究打下基础。 第二章的主要目的是为了探讨胶质瘤中脑肿瘤干细胞的形态学情况， 观察不同级别胶质瘤BTSC经贴壁分化，其子代分化细胞在HE染色后形 态学情况；并以神经干细胞为对照，观察两者球体内细胞超微结构学 特征。 方法：在第一章中，首先通过培养NSC的无血清培养方法分离培 养BTSC，并通过免疫荧光检测神经干细胞特异性标记物CDl33在BTS 上的表达；通过单克隆形成试验观察由单个BTSC增殖形成BTS的过 程，并进行连续传代培养观察其持续的增殖与自我更新能力；通过 M”法对BTSC进行细胞增殖活性检测，观察分离自不同级别胶质瘤 的BTSC其细胞增殖能力情况；利用含血清培养基对BTSC进行贴壁诱 胞上的表达，观察BTSC的多向分化能力；通过将BTSC子代分化细胞 更换培养条件，观察其在无血清培养条件下的增殖逆转情况。在第二 章中通过对BTS及BTSC与NSC的子代分化细胞进行HE染色，观察不 同病理级别胶质瘤BTSC与NSC其子代分化细胞在光镜下的形态学情 硕十学侍论文 中文摘要 况；通过对BTS和Ns进行透射电镜检测，观察两者球体内细胞的超 微结构学特征。 结果：第一章结果表明，BTSC其神经干细胞特异性标记物CDl33 免疫荧光表达呈阳性；BTSC可以进行单克隆试验，由单个母代BTSC 增殖形成BTS并进行连续传代培养；各级别胶质瘤BTSC增殖速率均 强于人NSC,同时，各级别间增殖速率亦存在差异，级别越高，则增 殖速率越快(P0．05)；BTSC能在含血清培养条件下进行贴壁分化， 免疫荧光检测显示其子代分化细胞具有表达神经元(NeuN)、神经胶质 无血清培养条件下仍能进行逆转增殖，再次形成BTS，病理级别高则 其再次成球时间相对较短，各级别间差异有显著性(P0．05)；同时， 再次形成的BTS其CDl33免疫荧光染色仍呈阳性表达。第二章结果表 明，BTSC与NSC在含血清培养条件下，其子代分化细胞在HE染色后 形态学上有明显差异。同时，不同病理级别胶质瘤的BTsc其子代分 化细胞在形态学上亦有较明显差异，与病理级别相符；透射电镜显示 BTS内部含大量增殖活跃、未分化的原始细胞，这与NS球体内部相 类似，但前者同时表现出一定的核异型性，显示了其肿瘤特质。 结论：1．BTSC具有与NSC相类似的干细胞特性：表达干细胞特 异性标记物、持续的自我更新与增殖能力、潜在的多向分化能力等。 2．与NSC相比，BTSC具有更为强大的增殖能力，同时其分化具有不 彻底性，其子代分化细胞在HE染色下仍显示显著的核异型性。同时， BTSC子代分化细胞在回复无血清培养条件后可再次增殖成球，重新 II 硕七学付论文 中文摘要 获得干细胞的表型。3．不同病理级别胶质瘤BTSC其增殖能力存在差 异，其子代分化细胞不仅在形态学上有较明显差异，而且在重新逆转 获得增殖的能力上也存在差异。这表明不同级别胶质瘤BTSC其内在 性质存在差异，提示其可能来自于不同起源。4．BTS与NS的超微结 构显示两者都属于增殖活跃的原始幼稚细胞，同时前者还具有一定肿 瘤异型性。 关键词脑肿瘤干细胞，增殖，分化，HE染色，透射电镜 III 堡±兰堡堡茎—茎奎塑墨 and ResearchOnCell OfProliferation Biology