苯巴比妥对癫大鼠海马苔藓纤维突触重组和认知发育的影响.DOCVIP

临床医学论文-苯巴比妥对癫大鼠海马苔藓纤维突触重组和认知发育的影响 ?????????????? 作者：陈燕惠 ，陈文雄 ，陈珊 ，郑耀辉 ，王丽??? 【摘要】? 目的 探讨苯巴比妥（PB）对不同发育期癫大鼠海马内苔藓纤维（MF）发芽与认知功能的影响。 方法 Wistar大鼠按出生后日龄分组（P5、P15、P25、P60），以红藻氨酸（KA）制备癫模型，实验结束取脑制片，行Timm染色，观察海马齿状回内分子层染色改变。认知功能测验采用跳台法。 结果 KA致对P5、P15组海马内MF发芽现象、大鼠学习记忆功能无明显影响，但可使P25、P60组大鼠海马内MF发芽现象加剧，伴学习、记忆成绩明显下降，PB可加剧这一现象。PB对未致大鼠海马内MF发芽现象和学习记忆功能无明显影响。 结论 海马MF突触重组是PB影响不同发育时期癫大鼠学习记忆功能的重要原因。 【关键词】? 苯巴比妥;癫;认知;苔藓纤维，海马;大鼠 　　癫发作与抗癫药物是影响癫儿童认知功能的重要因素。神经纤维突触重组不仅对癫的发生和发展具有十分重要的意义，而且对认知功能也有显著影响。笔者利用不同发育期大鼠红藻氨酸（KA）致模型观察传统抗癫药苯巴比妥（PB）对海马内苔藓纤维（MF）发芽与认知功能的影响。???? 　　1 材料和方法???? 　　1.1 动物 雄性Wistar大鼠160只，购自北京大学动物科学部，恒温动物室分笼饲养，自由饮水，明暗周期12h/12h。大鼠按出生后日龄（P）5，15，25，60d分为4组（P5、P15、P25、P60），体质量分别为（15±2）、（35±4）、（50±6）、（180±20）g。??? 　　1.2 致模型与分组 根据文献［1］，用KA（美国Sigma公司）制备癫模型。根据致与否以及药物将各年龄组大鼠分为A、B、C、D四组（n=10）:A、B组KA致后分别注射生理盐水（NS）或PB;C、D组不致分别注射PB或NS，均采用腹腔注射，1/d。PB（北京化工厂）60mg/kg，注射容积5mL/kg，连续给药15d。观察每日上午8∶00～12∶00大鼠行为。??? 　　1.3 学习记忆测验 采用跳台法即一次性被动回避性反射法，根据文献［2］方法设计。测试在用药第15d进行。测试时将大鼠放入跳台仪内，适应环境3min。调控电压36V，通电，大鼠受电击后跳上跳台逃避电击。跳下时以大鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应，训练5min，并记录5min内触电次数，满分为10分，被电击一次扣1分，所得分数为学习成绩。4h后重复测试。重复测试时，先将大鼠放于跳台上，同时秒表记录大鼠第一次跳下时间，为触电潜伏期，并记录3min内大鼠跳下的次数（错误数），满分为10分，跳下一次扣1分，所得分数为记忆成绩。???? 　　1.4 脑标本制备与判断??? 　　1.4.1 标本制备及Timm硫化银染色 ［3］? 阿拉伯胶、枸橼酸、枸橼酸钠、氢醌及硝酸银购自北京化学试剂公司。??? 　　1.4.2 结果判断 显微镜观察海马齿状回内分子层（inner molecular layer，IML），如见到棕褐色的色素带，提示海马内MF发芽。采用计算机显微图像分析系统（HPS-2000，华海公司）定量测定染色颗粒的光密度（D）。每一检测区各测3张脑片，求均值，作为该标本的平均D值。??? 　　1.5 统计学处理 实验数据以均数±标准差表示。率的比较用χ 2 检验;组间比较采用方差分析。???? 　　2 结果???? 　　2.1 自发癫发作现象 A组:实验期间P5、P15组均未见自发癫发作，P25、P60组在KA注射10d左右［（10.5±2.4）d］自发癫发作，发生率分别为20%（2只）和40%（4只），随着年龄增长自发癫发作比率增高（χ 2 =8.628，P0.05）。B组:P5、P15、P25组均未见自发癫发作，P60组有1只（10%）自发癫发作。B组自发癫发作现象明显减少（χ 2 =3.914，P0.05）。C、D组无自发癫发作。??? 　　2.2 被动回避学习成绩见表1。??? 　　2.3 海马齿状回（IML）改变（图1，表2） 有自发癫发作MF发芽程度（76.2±7.3）较无自发癫发作（55.2±8）明显（P0.001）。 　　表1? 各组跳台成绩比较（略） 　　与D组比较，*:P0.05，**:P0.01（下表同）.?　　A.红藻氨酸致;B.致后注射苯巴比妥;C.未致注射苯巴比妥;D.致后注射生理盐水。1.P5;2.P15;3.P25;4.P60.???? 　　图1? 大鼠海马苔藓纤维发芽现象（Timm染色 ×400）（略）???? 　　表2?