阿伦膦酸钠对骨髓生成破骨细胞骨吸收作用的影响.DOCVIP

临床医学论文-阿伦膦酸钠对骨髓生成破骨细胞骨吸收作用的影响 ???????????????? 作者：陈明，郑琼，方真华，勘武生 【摘要】? ［目的］研究阿伦膦酸钠对体外培养的小鼠骨髓生成破骨细胞及其骨吸收作用的影响。［方法］收集小鼠骨髓细胞于含有10-8mol／L的1，25二羟基维生素D3［1,25-(OH)2D3］的α-MEM完全培养基中体外培养，设置不同浓度的阿伦膦酸钠给药，并于培养的第6、9、12 d观察记录抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)阳性多核巨细胞［破骨样细胞(osteoclast-like cell,OLC)］生成数，反映破骨细胞生成情况。记数培养12 d骨磨片上骨吸收陷窝数及吸收面积，反映骨吸收情况。［结果］随着阿伦膦酸钠浓度的增高，TRAP阳性的细胞数减少，骨吸收陷窝数及面积均减少。［结论］阿伦膦酸钠可抑制骨髓细胞体外培养中破骨样细胞的形成，体外可抑制破骨细胞骨吸收作用。 【关键词】? 阿伦膦酸钠； 骨髓细胞； 破骨细胞； 骨吸收 ??? Abstract：［Objective］To study the effect of alendronate on bone resorption and osteoclast-like cells formation in mouse bone marrow culture.［Method］Marrow cells from kunming mouse were harvested and cultured in α-MEM with 10-8mol/L［ 1,25-(OH)2D3］. TRAP positive cells were recorded after 6,9 and 12 days exposure to various concentrations of alendronate in culture to reflect the formation of osteoclast-like cells. The number of bone resorption pits and area on bone slices? were counted to reflect the bone resorption at 12 days.［Result］TRAP positive cells, the number of bone resorption pits and area were reduced with the concentration increase of? alendronate. The inhabiting effect was dose dependent.［Conclusion］Alendronate has the inhabiting effects of oil bone resorption and the differentiation of bone marrow cells into osteoclast-like cells in vitro. ??? Key words：alendronate;? bone marrow cells;? osteoclasts;? bone resorption ???? 现代人工关节置换技术日趋成熟，临床应用日益增多，但后期假体无菌性松动严重影响此类手术的远期效果。人工关节松动最重要的原因是假体周围骨溶解，在此过程中破骨细胞发挥着重要的作用。二膦酸盐能通过多种途径抑制破骨细胞的骨溶解作用，因而有望用于防治人工关节松动［1，2］。本实验通过观察阿伦膦酸钠对破骨细胞生成的影响，进一步认识阿伦膦酸钠在防治骨溶解中的作用机理，为其用于临床防治人工关节松动提供理论依据。 ??? 1? 材料和方法 ??? 1.1? 材料 ??? 本实验选用6～8周昆明小鼠(购自华中科技大学同济医学院动物中心)；1，25-(OH)2D3(Sigma)，α-MEM培养基(Sigma);胎牛血清(Gibco)；(萘酚AS-BI磷酸钠，六偶氮副品红，酒石酸钾钠)自配；阿伦膦酸钠由默沙东公司提供，薄骨片自行制备。 ??? TRAP孵育液的配制：孵育液A液，0.2 mol／L醋酸缓冲液，pH5.0；B液，六偶氮副品红，取副品红1 g加去离子水20 ml，浓盐酸5 ml，加热至90℃过滤制成副品红溶液，置于黑色瓶4℃储存，临用前与4％亚硝酸钠等比例混合；C液，取萘酚AS-BI磷酸盐20 mg加入N-二甲基甲酰胺1 ml溶解。取A液18 ml、B液1 ml、C液1 ml混匀，用1 mol／L氢氧化钠或盐酸调pH至5.0，加入酒石酸钾钠282 mg配成TRAP孵