南极适冷菌Pseudoalteromonas+sp.S-15-13胞外多糖研究.pdf

南极适冷菌Pseudoalteromonaxsp．S-15—13胞外多糖的研究 Itermonas5—13 南极适冷菌Pseudoa sp。S一1 胞外多糖的研究 摘要 南极海洋环境寒冷，一些区域终年覆盖冰雪。空间的特殊性和每年海冰形成 活动中季节的大幅浮动，使微生物栖息环境具有高度的多样性，进而形成了不同 的微生物群落。生存于南极生态系统中的微生物的多样性是开发具有特殊应用价 值的活性物质(包括EPSs)的资源库．南极海冰中发现了大量的微生物(海冰 微藻和细菌)及其产生的胞外多糖，这些物质聚集在冰藻和细菌生存的海冰通道 中，提供了海冰和冰水界面的有机碳，是能源传输的主要物质；并且还可以保护 细胞在结冰时免受冰晶的伤害，缓冲pH以及盐浓度的变化，可以降低其它化学 物质的伤害。南极微生物的胞外多糖在南极生态系统中具有重要的意义，然而， 南极微生物胞外多糖的免疫活性和潜在的生物生化应用价值尚未见报道。因为一 些胞外多糖具有重要的生物及医用价值，如潜在的抗肿瘤、免疫调节以及降血糖 等特性．为此寻找分泌特殊应用价值胞外多糖的微生物(包括极地微生物)的工 作已经广泛展开。本研究以中国第十九次南极科学考察采集的海水海冰样品中的 57株南极细菌为材料，通过胞外多糖的染色方法筛选出27株产糖菌；其中一株 rDNA鉴定确定为假交替单胞菌属；通过对该 高产糖南极海洋菌S．15．13经16S 茵的培养条件的研究以及对其胞外多糖的分离纯化获得纯度较高的样品；采用气 对荷瘤(S180)小鼠的免疫增强作用进行研究；对该胞外多糖的低温适应机制以 及低温保护作用进行初步探讨，以期为南极细菌的适冷机制以及南极资源的开发 利用提供科学依据。 微镜检测法共筛选出产胞外多糖的菌株27株。 16SrDNA鉴定结果表明，南极 南极适冷营PseudoalteromonasS-15-13胞外多糖的研究 sp 单胞菌是南极生态系统中最常见也是很重要的一类细菌，所以对其进行进一步的 研究。南极海洋菌Pseudoaltermonas sp．S-15—13的外形观测结果为：细胞呈杆 状，长度为1．OX2．8(pm)，极生鞭毛可以运动。生理生化鉴定结果表明，南 极海洋菌Pseudoaltermonas sp．S-15—13革兰氏染色阴性，兼性厌氧，氧化酶、 接触酶、尿素酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶反应里阳性； 硝酸盐还原反应、吲哚试验、明胶液化试验、H2S试验、非试验、vP试验、ONPG 试验、鸟氨酸脱羧酶反应均呈阴性。 2．对南极海洋菌S-15-13的实验室培养条件进行的研究结果表明，南极海洋 菌S-15-13可以产生胞外多糖，最佳产糖条件为：培养时间，56h；温度，8C； 最佳碳源，浓度为1％的葡萄糖：最侣tNaCl浓度，3％；最佳pH值6-7。试验结果 表明，南极海洋菌在4～25C下均能正常生长，因此确定该菌为适冷菌，即南极 适冷菌s一15．13。IOOL发酵罐结果表明，可以利用外接冰水作为循环水来控制发 酵罐内温度，从而保证南极适冷菌}15一13正常生长，其它条件与实验室培养条 件大体相同，胞外多糖的产量与实验室发酵相比有所提高。 3．南极适冷菌s一15—13发酵液经乙醇沉淀、去蛋白后获得粗多糖。多糖粗品 A-50离子交换层析初分获得两个组分EPS—I和EPS-II，分 经DEAE-Sephadex G．1 00凝胶层析进一步纯化，均获得对称的单一峰。冷冻干燥的 别经Sephadex 样品经碘．碘化钾反应、双缩脲反应、a．萘酚显色(Molish)反应、uv以及HPLC 检测，无蛋白、核酸、小肽及其它杂质存在；表明样品纯度较高，符合进一步分 析和研究的要求。以高效凝胶渗透色谱(HP．GPc)测定两个多糖组分EPS-I和 EPS-11分子量分别为：23kDa和62kDa。 4．对南极适冷菌S-15—13胞外多糖的单糖组成以及结构进行分析。Gc分析 结果表明，胞外多糖EPS—I由D一甘露糖