受四环素调控基因工程雄性不育系统导入水稻研究.pdf

受四环素调控的基因工程雄性不育系统导入水稻的研究 中文摘要 两系法杂交水稻使用的两用核不育系因异常低温的影响会产生育性波动，从而杂 交种子生产过程中存在风险。本研究将四环素诱导表达的雄性不育系统导入粳稻光温 敏核不育系40085和台北309中，目的是创造四环素诱导雄性不育和光温敏雄性不育 相结合的水稻新型两用核不育系。这种新型的不育系在遇到异常低温时，喷施四环素， 四环素与re‘tR蛋白结合使TetR发生形变而从不育基因操纵序列上解离，解除不育基 因的阻遏而表达雄性不育，从而消除异常低温造成的育性波动，为目前的两系法杂交 水稻系统提供更加安全的技术基础。其主要研究结果如下: 1.水稻基因型是影响水稻再生体系的主要因素。 2.添加1.Omg/L的ABA可以有效地改善水稻愈伤组织的生长状态，降低褐化现象。 3，用幼穗为外植体诱导出的愈伤组织质量优于成熟胚诱导出的愈伤组织质量。 4.通过GUS基因的瞬时表达确定了GJ-1000高压气体基因枪的轰击参数。1100psi 的压力和6.5厘米的轰击距离的转化效果最好，平均每块愈伤组织的蓝点数最多。 5.成功地将四环素诱导表达的雄性不育基因导入粳稻光温敏核不育系40085和台北 309中，40085获得6株转基因植株，台北309获得15株转基因植株。其中台北 309的外源基因转化率为4.5%,4009S的外源基因转化率为 1.9%。导入TetR基 因的植株有13株，导入Bamase基因的植株有11株，同时导入TetR基因和Barnase 基因的转基因植株有3株。 6.PCR,Southern杂交检测表明:调控蛋白(TetR)、四环素调控和绒毡层特异性表 达复合启动子 (TA29-TX).雄性不育基因((Banase)均已整合进水稻的基因组中。 关键词:水稻;雄性不育;四环素调控和绒毡层特异性表达复合启动子;转化; Astudyontransformationofageneticengineeringmalesterilesystem conditionedbytetracyclineinrice Abstract Themalesterilityofphoto-sensitiveandthermo-sensitivegenicmale sterilelineoftwo-linehybridricefluctuatesatlowtemperature,whichmakes theriskoftwo-linehybridriceinseedproduction.Thepaperfocuseson transformationofthetetracycline-regulatedmalesterilesystem intorice 4008sandTaibei3Q9(ClryzasativaL.sbuspjaponicaKato),inordertogaina newtwo-linehybridgenicmalesterilelineofwhichthemalesterilityis affectedsimutaneously勿tetracyclineandphoto-thermofactors.Whenthe newmalesterilelinemeetsabnormallowtemperatureatthermo-sensitive stage,thespraiedtetracyclinecanpenetratesintoplantcellandbindstoTetR protein,whichmakestheTetRproteindeparturefromtheoperatorofbarnase gene.Theexpressionofbarnasegenewillelimilatethefluctuationofthemale sterility.Itisexpectedforofferingasafertechniqueapproachforthetwo-line hybridrice.Themainresultsofthethesisaresummarizedasbelow: I.Genotypeisadominantfactorinregenerationsystemofrice 2.Thequalityofcallicanbeimprovedbysupplemen