铜绿假单胞菌生物被膜形成早期相关基因研究.pdf

摘要 摘要 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeTuglnOSa)，又名绿脓杆菌，属革兰氏阴性 杆菌，是一种重要的条件致病菌，它能在机体腔道、各种组织及体内留置的生 物医学材料的表面形成生物被膜，从而导致顽固性感染。鞭毛介导的泳动和IV 型菌毛介导的蹭动在被膜形成的早期起重要作用，这两种运动能力丧失的突变 子，不能正常形成生物被膜。 本文以一株临床分离的铜绿假单胞菌PA68做受体菌，应用Mu转座复合物 技术从反向遗传学的角度对鞭毛和IV型菌毛运动的相关基因进行研究。在现有 技术条件下，对№转座复合物的电转化条件进行了进一步的优化，并从600个 Mu插入的突变子中共筛选出泳动能力丧失或减弱的突变子4株，蹭动能力丧失 或减弱的突变子3株，蜂群运动能力丧失或减弱的突变子4株。其中突变子Y46 丧失了泳动运动能力的同时，蹭动能力也发生了减弱；突变子Y41丧失了蹭动 BLAST对比 能力，同时泳动能力减弱。经过基因克隆、核苷酸测序、Genbank 确定了Mu转座子插入基因组的确切位置舀}果显示在Y46和Y4I两个突变子中， 例以刀为III类基因。选择Ⅳ类基因PAl550进行反向互补实验对其功能进行分析。 能力及蹭动能力恢复，推测PAl550基因的编码产物可能要与特定的因子协同作 用才能使菌体产生运动能力。 鞭毛的运动方向受趋化作用系统控制，趋化作用系统的应答调节蛋白 cheY(response 趋化作用系统Cluster4中的一个组分，并且与用刃刀在空间结构上具有高度相 似性，而例甜刀已经证明与鞭毛的合成具有密切关系。针对这一点，本实验通 了蜂群运动和泳动能力的检测，结果表明PA0174的失活使铜绿假单胞菌的鞭毛 的泳动能力明显减弱。 关键词：铜绿假单胞菌泳动蹭动反向互补 摘要 ABSTRACT Pseudomonasisan ofhLunans． aeruginosaimportantopportunisticpathogen and Thebacteriacancolonizea ofsurfacesform causes variety biofilm，which infectioninthehost mediated mad motility persistent Swimming byflagellum mediatedIV very roleintheinitiation twitchingmotility bytypepiliplay important biofilm deficientin and of formation，mutantstwitching loss of swimmingability biofilmformation． initiating Inthis WaSusedto the involved study，Mutranspositiontechnique studygenes in