臂形草内生真菌菌株HND5的分离、抗性评价及其初步鉴定.pdfVIP

维普资讯 第28卷 第2期 热 带 作 物 学 报 Vo1．28 No．2 2007年 6月 CHINESEJOURNALOFTROPICAL CROPS 臂形草内生真菌菌株HND$的分离、 抗性评价及其初步鉴定 郭志凯 王 蓉 蔡吉苗 黄贵修 海喜南雯砻省热菩带农业有害生物检测监控重点篓实验妻室霎海碍南儋尾。州川571737 摘 要 对我阁主要臂形草 (Brachiariasp．)种质 内生菌进行了活体检测、内生菌分离纯化、抗性评价及其初步 鉴定。利用改 良的苯胺蓝染色法对臂形草 内生菌活体检测结果发现，内生真菌广泛存在于供试的9个臂形草 品平4’巾；通过组织块培养法从供试材料叶片中分离获得 内生真菌菌株 HND5；体外抗性分析实验结果表明， HND5菌株对多种重要病原真菌具有明显的抑菌活性和较强的耐盐碱性；经初步鉴定，该菌株属于半知菌类 (FungiImperfecti)从梗孢 目(Moniliales)从梗孢科 (Monil|aceae)枝顶他属 cremonum)真菌。 关键词 臂形草 HND5 抗性评价 初步鉴定 中图分类号 $482．292 内生菌普遍存在于 目前已研究过的各种植物中，尤其在臂形草属 (BraehiariⅡsp．)植物中广为分布_l~]]。 近几年，国外对植物 内生菌的研究和利用 已成为热点 ，对臂形草属牧草内生菌的分离、鉴定和抗性分 析也有一些报道 ]。但是，对于我国热区特殊地理环境发展的臂形草产业来说，臂形草内生菌资源 的研究与利用尚未见报道。笔者对我国主要臂形草种质 内生菌资源进行了调查、分离、抗性评价及其初 步鉴定，发现臂形草广泛存在着 内生真菌，并从其叶片中分离获得 了 1株对多种重要病原真菌具有 明 显的抑菌活性和较强的耐盐碱性的内生真菌菌株 HND5，旨在分离获取具有体外抗病菌活性的内生真 菌，为今后进一步研究臂形草与内生真菌互作机理及其开发应用奠定基础。 1 材料和方法 1．1 材 料 供试的9个臂形草品种 由中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所刘 国道研究员、易克贤研 究员提供，供试菌株水稻稻瘟菌 (Magnaporthegrisea)Y34菌株 由中国热带农业科学院环境与植物保护研 究所郑服丛研究员提供，芒果炭疽病病原菌 (Colletotrichumgloesporioides)菌株 SC2和香蕉枯萎病病原菌 (Fusariumoxysporumf．sp．cubense)菌株FOC19由本实验室分离。 1．2 方 法 1．2．1 臂形草内生菌活体检测 内生菌的活体检测方法参照文献[11]的方法进行。将获得的无明显症 状健康的叶片组织剪成 1～2cm长，置于2mL离心管中并标记好，用固定液处理好后，利用改 良的苯胺 蓝染液 (苯胺蓝 0．1g，体积分数 70％酒精 100mL，体积分数 85％乳酸 50mE)染色，脱色处理后进行镜 检 (胞间蓝色菌丝体或孢子体即为内生菌菌丝体)。每个品种叶片中有 1份检查到内生菌的，即计为受 侵染品种。以经过去除内生菌处理的同种质叶片作为对照。 1．2．2 HND5菌株的分离纯化与回接 采用组织分离法从健康组织中分离获得 内生真菌菌株HND5： 选取健康叶片，剪成长度约为0．5～1cm的组织块进行表面消毒 (消毒程序为：75％酒精 1min，体积分数 3．25％的活性次氯酸钠溶液浸泡6min，然后用 75％酒精浸泡0．5rain，最后用无菌水清洗 4次，取第4次 清洗的无菌水涂布平板以检验消毒效果)，无菌滤纸吸掉叶片上多余的水分后将其接种到PDA平板 (含 海南省教育厅高等学校科研资助项 目，项 目编号：Hj~200321 郭志凯 男，1983年生，在读硕士。研究方向：内生菌资源的研究与利用。 通讯作者：黄贵修，男，1968年生，博士。电话：0898E—mail：hgxiu@vip．163．com 收稿 日期：2006—07—26 修回日期：2007—02-02