BLG调控区指导hLF基因在GMECs、SP20和杂交瘤细胞中表达研究.pdf

中文摘要 瘤细胞中表达的研究 中文摘要 研究生：丁国梁 导师：成勇教授 本实验利用电转染法将含有人乳铁蛋白基因的表达载体，导入到山羊乳腺上皮 细胞和小鼠骨髓瘤细胞中，经G418及PCR筛选获得阳性细胞；转染细胞增殖后经催 乳素诱导，培养液上清通过ELISA检测证明，转染细胞表达并分泌出入乳铁蛋白。 利用细胞融合技术将未转染人乳铁蛋白基因的小鼠骨髓瘤细胞与表达人乳铁 蛋白的ICR小鼠的脾细胞进行融合，经过HAT筛选获得杂交瘤细胞株。细胞增殖 后经催乳素诱导，培养液上清通过ELISA检测。同样获得了表达人乳铁蛋白的阳性 杂交瘤细胞株。 1 BLG调控序列与人乳铁蛋白功能基因构建表达载体 表达载体的组成：山羊D．乳球蛋白基因调控序列，包括4．2kb的5、端和1．8kb 序列和新霉素抗性筛选基因(Neo‘)等基因元件 2奶山羊乳腺上皮细胞系的建立 从泌乳奶山羊的乳腺实质组织中分离得到原代乳腺上皮细胞，由于原代上皮 细胞中含成纤维样细胞混合生长，所以传代时本实验采用分步胰酶消化反复贴壁 法在DMEM／F12培养液中经2～3次的选择传代可获得纯的乳腺上皮细胞系。 3表达人乳铁蛋白的奶山羊乳腺上皮细胞株和SP2／O细胞株的建立 通过电转染法将含有Ne07标记基因的BLC．14载体基因片段导入奶山羊乳腺 2 中文摘要 性细胞株。对扩大培养的抗性细胞株进行催乳素诱导，收集诱导24h后的细胞上 人乳铁蛋白，乳腺上皮细胞的平均表达水平是0．781“g／mL，以及12株表达人乳铁 蛋白的小鼠骨髓瘤的阳性细胞株，小鼠骨髓瘤细胞的平均表达水平是O．435pg／mL。 4表达人乳铁蛋白的杂交瘤阳性细胞株的建立 通过未转染人乳铁蛋白基因的小鼠骨髓瘤细胞与表达人乳铁蛋白的转基因小 鼠的脾细胞融合，经过HAT筛选获得54株整合有人乳铁蛋白基因的杂交瘤细胞 株。经过蛋白质表达检测共有6株稳定表达的阳性杂交瘤细胞株，阳性杂交瘤细 胞株平均表达水平是0．653ug／mL。 结果表明，本实验室所构建的BLCl4载体既能够在山羊乳腺上皮细胞表达， 同样在非特异性宿主细胞一小鼠骨髓瘤细胞和杂交瘤细胞中也能够表达的结果， 可以推测出BLG调控序列与人乳铁蛋白功能基因构建的表达载体转染小鼠骨髓瘤 细胞后，可以对小鼠骨髓瘤细胞的生物学特性产生影响，导致骨髓瘤细胞表达出 功能性的人乳铁蛋白。 关键词：乳腺特异性表达载体；人乳铁蛋白；乳腺上皮细胞；小鼠骨髓瘤细胞； 杂交瘤细胞；转染 Abstract 3 onBLGas direct Study regulatorysequence human·lactoferrincDNA inGMECs、 expression SP2／0and ceUs hybridoma M．S．Candidate：GuoliangDing Supervisor：Prof．YongCheng Abstract The Vector BLGmLFcDNA m锄ma巧gland-specificexpressionalcontaining transfectedinto cellsand cells (BLC-1 myelomab