蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究.pdfVIP

云南农业大学学报　ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１４，２９（１）：５８－６２ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＩＳＳＮ１００４－３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸ Ｅｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕｅｄｕｃｎ ＤＯＩ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００４－３９０Ｘ（ｎ）２０１４０１０１２ 蓝舌病多克隆抗体 ＣＥＬＩＳＡ检测 方法的建立和比较研究   苗海生，李　乐 ，廖德芳，杨永钦，李华春 （云南省畜牧兽医科学院，云南 昆明６５０２２４） 摘要：为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法，本研究通过制备群特异性的蓝舌病多 克隆检测抗体和优化抗原固定技术，建立了蓝舌病多克隆抗体ＣＥＬＩＳＡ检测方法。通过对 １５０份牛羊已知阴 性血清的检测确定该检测方法的ｃｕｔｏｆｆ值为４０％；对５８份已知阳性血清样品同时进行中和实验和ＣＥＬＩＳＡ检 测，检测结果经ＳＰＳＳ软件进行ｔ检测统计分析，Ｓｉｇ（双侧）＝０６５１，相关性０９１２，相关性显著。对２４个 ＢＴＶ血清型阳性血清，２份牛ＢＶＤ阳性血清，２份羊口蹄疫阳性血清，２份羊痘阳性血清进行检测。结果表 明，２４个ＢＴＶ血清型阳性血清为阳性，其他血清全部为阴性。对 １５０份已知阴性血清和５５份已知阳性血清 用中和试验、美国ＶＭＲＤ公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明，本检测方法与中和试验检测结果符 合率达１００％，进口试剂盒符合率为９６７％。 关键词：蓝舌病；ＣＥＬＩＳＡ；多克隆抗体 中图分类号：Ｓ８５２６５　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１４）０１－００５８－０５ ＲｅｓｅａｒｃｈｏｎＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＢｌｕｅ ｔｏｎｇｕｅｖｉｒｕｓＭｕｌｔｉｃｌｏｎｅＡｎｔｉｂｏｄｙＣＥＬＩＳＡ ＭＩＡＯＨａｉｓｈｅｎｇ，ＬＩＬｅ，ＬＩＡＯＤｅｆａｎｇ，ＹＡＮＧＹｏｎｇｑｉｎ，ＬＩＨｕａｃｈｕｎ （ＹｕｎｎａｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙａｎｄＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｋｕｎｍｉｎｇ６５０２２４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｌｏｗｃｏｓｔａｎｄｓｉｍｐｌｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｒｏｕｇｈｐｒｅｐａ ｒａｔｉｏｎｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｏｆｂｌｕｅｔｏｎｇｕｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｔｉｂｏｄｙａｎｄａｎｔｉｇｅｎｆｉｘｅｄｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｂｌｕｅ ｔｏｎｇｕｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙＣＥＬＩＳＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｂｙｄｅｔｅｃｔｉｎｇ１５０ｃｏｗｓａｎｄ ｓｈｅｅｐｎｅｇａｔｉｖｅｓｅｒｕｍ，ｔｈｅｃｕｔｏｆｆｖａｌｕｅｗａｓ４０％．Ｆｉｆｔｙｅｉｇｈｔｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ ＶＮＴａｎｄＣＥＬＩＳＡａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ，ａｎｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙａｎａｌｙｚｅｄｂｙＳＰＳＳｓｏｆｔｗａｒｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔＳｉｇ．（ｂｉｌａｔｅｒａｌ）＝０６５１，ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗａｓ０９１２；２４ｔｙｐｅｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｏｆＢＴＶ，２ＢＶＤｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍｏｆｃｏｗ，２ＦＭＤＶｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｏｆｓｈｅｅｐａｎｄ２ｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｏｆｇｏａｔｐｏｘｗｅｒｅａｌｌｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙ ＣＥＬＩＳＡ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅ２４ｔｙｐｅＢＴＶｐｏｓｉｔｉｖｅｓｅｒｕｍｗｅｒｅａｌｌｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｏｔｈｅｒｓｅｒｕｍａｌｌ ｎｅｇａｔｉｖｅ．Ｏｎｅｈｕｎｄｒｅｄａｎｄｆｉｆｔｙｋｎｏ