杜氏肌营养不良植入前遗传学诊断体系的建立与临床前研究.pdf

摘要 diagnosis，PGD)是辅 植入前遗传学诊断(preimplantationgenetic 助生殖技术与遗传学诊断技术相结合而成的一种孕前诊断技术，它是 在胚胎着床前对其遗传物质进行分析，做出相应的遗传学诊断，仅将 无遗传缺陷的胚胎植入子宫。PGD技术不仅可防止遗传病的发生， 而且避免了选择性流产、引产给妇女带来的身心压力，是现代医学的 神经肌肉系统中最常见的X-连锁隐性遗传病，发病率、死亡率高且 尚无有效治疗方法，目前主要通过产前诊断防止DMD患儿的出生。 对DMD进行PGD不仅可以防止DMD患儿的出生，而且能够避免 反复流产、引产对孕妇造成的身心伤害，达到提高生活质量、减轻家 庭和社会负担的目的，是一种比产前诊断更为积极的孕前诊断措施。 但可用于PGD分析的材料非常有限，通常只有1．2个细胞，所以建 立可行的单细胞基因检测技术是开展DMD植入前遗传学诊断的先决 条件。 本研究旨在通过建立单细胞三重PCR技术检测DMD基因部分 外显子和性别鉴定位点Amelogenin基因，探讨该技术用于在缺失型 杜氏肌营养不良家系中对携带者进行植入前遗传学诊断的可行性。通 过显微操作获得正常人及缺失型DMD患者单个淋巴细胞及无DMD 阳性家族史夫妻行ⅣF．ET／ICSI后废弃的单个卵裂球细胞，对以上单 显子和性别鉴定位点Amelogenin基因。结果显示在淋巴细胞扩增中 显子缺失型患者扩增阳性率为95．8％(46／48)，假阳性率3．3％(1／30)； 47号外显子缺失型患者扩增阳性率为95．8％(46／48)，假阳性率0 证明本研究所建立的单细胞三重PCR技术具有较高扩增阳性率和特 异性，有望在缺失型DMD家系中开展PGD的临床应用。并为其它 单基因病植入前遗传学诊断的开展建立了较稳定的技术平台。 关键词单细胞PCR，杜氏肌营养不良，植入前遗传学诊断，DMD 基因，Amelogenin基因 ABSTRACT anew Preimplantationgeneticdiagnosis(PGD)ispregestational with technology assisted diagnosis developed reproductiontechnology and hasbeen to diagnosistechnology．This applied genetic technology make before ofthe avoid geneticdiagnosisimplantationembryos，thus Wim disorderstotheuterus．PGD transferringembryosdiagnosedgenetic isa inthemodemmedicinewhichcannot veryimportantprogress only theoccurrenceofinherited also to prevent disease，but help greatly reducethe andmental causedelectiveabortionand