父本基因组在小鼠卵母细胞中的主动去甲基化研究.pdfVIP

摘 要 受精稻小鼠卵子中父本基嗣组的主动去甲基纯对予饺人前的胚胎发育楚非常重要豹。然丽植 入前胚胎主动去甲基化的机制仍不甚明了，DNA去甲慕化酶是否确实存在于MII卵母细胞胞质 中还是源国母本基因组墩朱有确切结论。 为判定MII卵的胞屣还是母本基因组对于父本基因组的主动去甲基化起作用，我们将冻融的 精予头注射到正常或去核的MII卵中，然后研究了其中父本基因组煞甲基佬状态。我蜘逶过5一 甲基胞疃啶免疫染色的方法比较了单倍体和二倍体孤雄胚胎(通过注射一个或豫个精子头到去核 的MⅡ卵)、ICSl(introeytoplasmicsperminjeetion)胚耱、兰倍体胚胎(注射两个精子头到完整M珏 卵)以及原核移披生产的莛构孤雄胚胎。结果显示所有实验组的胚骀都能发生父本基因组的主动 去甲基化。 我们还健崩bisulfite攫4序的方法检测了原核期和囊胚期持家基因翻印迹基因CpG位点的甲 基化变化，来比较植入前孤雄胚胎发育中两种基阂的甲蒺化模式。我们收集了双精注射和原核移 棱生产flg二倍僖孤雄珏黪受糖赢8h的艇攘和睫囊发育藤成的囊髓，对于持家基因a-actin以及印 control 逑基因H19和自筘之间的ICR(imprintingregion)的甲基化水平进行了分析。通过bisulfite 处理后测滓，绩聚显示璃子中处于完全甲基纯状态的a-actin基因在受糕后所鸯c晒饿点都完全 去甲基化了，并ji可能维持这种状态至囊胚期。相反， ICR在孤雄胚胎原核期和囊胚期的甲基 优承平帮只是鞘蠢降低。我们髂结栗说明了父零基因缀中静持家基禹在原援期会被完全去甲基 化，而一些印迹熬因则不能进行生动去甲基化。印迹基因甲基化被保留的原因或许取决于它在父 本表达还是母本袭这。 蓑键词：主动去甲基诧孤雄驱籍受瘦染色c嫡 Abstract Active of inmouse is demethylationpaternalganome oocyte fertilizationcrucialfor following of mechanismofactive of developmentembryo．However,the pre-implantation demethylationpaternal isnotwell DNA understood，andwhetherthe existsin orreleasedfrom genome demethylase cytoplasm maternal isnotknown．． genome TodeterminewhetherthemurineMII orthematemal therole cytoplasm genomeplay during active of the statusof demethylationpaternalgenome，weinvestigatedmethylation genome paternal head intointactor chromosome frozen-thawed-sperm followingint