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肾细胞癌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子研究 (摘 要) ， ／背景与目的 i肾细胞癌(RCC)是常见的泌尿系恶性肿瘤，近年发病率明显上升。由于 目前还没有发现该肿瘤的标记物，术前诊断和鉴别诊断主要依据影像学检查， 常常发生困难；早期发现和术后随访监测也缺乏理想的方法。大量研究表明血 管生成是实体肿瘤生长、进展和转移的必要条件，而血管生成因子的活性增高 在肿瘤血管生成过程中起着十分重要的作用。血管内皮生长因子(VEGF)和 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是最重要和作用最强的两个血管生成因子， 研究显示VEGF和bFGF的表达在人类恶性肿瘤中广泛存在，在相当一部分肿 瘤病人的血清或尿液中检测到VEGF和bFGF升高。RCC是具有丰富血管生成 的实体瘤的代表，研究表明VEGF和bFGF在RCC组织中过度表达。{ 本课题用免疫组化染色研究RCC组织中VEGF和bFGF的表达情况，并在 此基础上用组织蛋白质提取和ELISA定量分析的方法测定对照者和RCC患者 手术前后血清和尿液中以及相应肿瘤组织中的VEGF和bFGF水平，探讨患者 血清、尿液中VEGF和bFGF作为RCC肿瘤标记物的可能性及其临床意义。 第1部分肾细胞癌组织中VEGF和bFGF免疫组化研究i ， (材料与方法 手术切除的肾细胞癌组织32例，根据TNM分期的不同组合分为：I～II 期22例，ⅡI～IV期10例；12例正常肾组织作为对照。分别应用VEGF和bFGF 抗体采用Envision两步法进行免疫组化染色。 结果 VEGF在RCC组织中阳性部位主要位于肿瘤细胞的胞浆和细胞膜，少数血 管内皮细胞和基质中也可见阳性染色，在正常肾组织中阳性染色见于少数肾小 管细胞和’肾小球内皮细胞。肾癌组织中VEGF阳性率(87．5％)和强度明显高 bFGF在RCC组织和正常肾组织中阳性部位与VEGF相似。肾癌组织中 之间bFGF表达强度无统计学差异。 第2部分 肾细胞癌患者血清、尿液中VEGF和bFGF定量研究 ， ／材料与方法 、RCC忠者61例，根据TNM分期的不同组合分为4期：I期7例，II期 30例，III期9例，IV期15例。根据肿瘤三维直径计算原发肿瘤体积。对照组 40例，包括肾良性疾病20例和健康普查者20例。所有对象均在治疗开始前采 集外周静脉血和收集中段尿，其中30例RCC病人在根治性肾切除术后6周再 次采血和留中段尿，29例在肾切除时采集了新鲜肿瘤组织，另外采集12例正 常肾组织标本作为对照。 以TRIZOL试剂和组织匀浆法提取组织蛋白质并采用Bradford比色法进行 蛋白质定量。所获组织蛋白提取液和血清、尿液均以双抗体夹心ELlSA方法 (RD公司试剂盒)测定VEGF和bFGF含量，严格按照试剂盒说明书进行操 作。尿液中bFGF和VEGF值以该样本中肌酐浓度进行校正，组织提取液中bFGF 和VEGF值以该样品中的总蛋白质含量进行校正。 结果 所有RCC患者和绝大多数对照者血清、尿液和组织样本中均检测到VEGF。 RCC患者血清和尿液VEGF平均水平分别为327．77±283．34 pg／ml和99．60± 102．28 pg／mg，都显著高于对照组(血清、尿液VEGF分别为124．734-54．51pg／ml 和6124-4．40 pg／mg)。RCC病人随着分期升高血清、尿液VEGF均呈相应升 高的趋势，有转移的病人中升高尤其明显(血清和尿液中平均水平分别为664．36 --+470．30 pg／ml和224．02+141．25pg／mg)；且各期肾癌病人的血清和尿液VEGF 水平均高于肾良性疾病患者。血清和尿液中VEGF水平与肿瘤体积之间没有相 关性。RCC组织中VEGF含量显著高于正常肾组织，并与对应的患者血清和尿 液VEGF水平均有相关性(相关系数分别为0．69和O．63)。肾切除术后6周绝 大多数肾细胞癌患者血清和尿液VEGF明显下降，术后平均水平与对照组相当。 40例对照者血清中仅5例检测到bFGF，61例RCC血清中46例检测到 bFGF。RCC病人的血清bFGF检出率明显高于对照组，随着分期升高血清bFGF 检出率和平均水平均呈升高趋势，有转移的病人升高尤其明显(检