hTERT-659G＞A+SNP位点的多态性分析及其与肿瘤易感性的相关性研究.pdf

摘要 摘要 研究表霹端粒酶的激活可能是体缨胞内瓣瘤细胞转变的关键步骤，是缁胞 癌变的早期事件。绝大多数肿瘤的发生是环境因素与肿瘤遗传易感因素共同作 用的结果。单核苷酸多态性是肿瘤遗传易感性研究的热点领域。对人端粒酶逆 TelomeraseReverse 转录酶(Human 性位点与肿瘤易感性之间关系的研究量前国外有少量文献报道，国内尚属空自。 本课题对hTERT基因上的rs2736098单核苷酸多态位点与中国汉族人群肿瘤易 感性的关系进行了研究。rs2736098SNP位点为hTERT基因第2外显子上的丙 氨酸同义突变cSNP位点，为鹦嘌呤到腺嘌呤的碱基转换突变。 采集健康查体者静脉血样100例、非肿瘤患者静脉血样65例、肿瘤患者静 脉血样123例。其中在非肿瘤患者中男性33例，女性32例，肿瘤患者中男性 72例，女性51例。应用两对内侧引物和一对外侧引物进行PCR扩增，并设计了 针对该单核苷酸多态位点的寡核苷酸探针，建立了单碱基突变的点杂交检测方 法，并对上述所有样本进行了基因型分析。应用PCR-SSCP结合DNA序列测定 法对杂交结果进行验证。 研究结果发现在全部检测人群(288入)中，GG基因型244例，AG基因型 35例， AA基因型9例，基因型频率符合哈追一温伯格平衡。其中A等位基因 频率为0．090，G等位基因频率为0．910，比较发现本研究人群的SNP位点等位 基因频率与NCBI数据库上收录的该SNP位点中国汉族人群中的等位基因频率 有较大差异，与非洲人群中的分布频率近似。 在对该SNP位点与肿瘤易感性的分析中，发现肿瘤患者组中该SNP位点的 A等位基因的频率要高于非肿瘤组中的个体，统计学差异极显著(尸0．01)。 发现肿瘤组的男性患者中该SNP位点的等位基因A的频率要高于非肿瘤组的男 性患者，统计学差异极显著(默0。01)。与蒡孛瘤组女性相比，肿瘤组男性个体的 肿瘤患病风险要高，OR值为2．07。提示该SNP位点的G—A的转换可以增加 携带者，特别是男性个体的肿瘤患病风险。 在实验过程中，还发现所有AA基因型样本在常规条件下应用内侧引物1 均无PCR产物扩增，且不受模板浓度和rTaqDNA聚合酶的影响。在换用内侧 引物2和外侧引物、或高保真DNA聚合酶、或引物配比、或100℃变性温度下 摘要 可扩增出相应的PCR产物。 本课题研究结果显示。1)中国汉族人群中的rs2736098SNP位点的等位基 因频率与非渊人群中的分布频率近似。2)该SNP位点与肿瘤易感性之闻存在一 定的关系，可以增加携带者，特别是男性个体的肿瘤患病风险。3)该SNP位点 存在PCR偏倚现象，可能对端粒酶逆转录酶的活性调节有影响。 关键词：单核替酸多态性；肿瘤；人端粒酶逆转录酶；PCR偏移 II Abstract SomeresearchindicatedthattheactivationoftelomeraselSthe essential possible whichthesomaticeeUtransformstothetumor the eventofcell cell，and step，in early canceration．Theoccurrenceoftumorisonaccountofcombinedeffectthe by andthetumor factors．The of environmental sensitivity relationship ag