产微生物谷氨酰胺转胺酶菌株的筛选及酶性质研究.docVIP

摘  要  谷氨酰胺转胺酶 ( 蛋白质 - 谷氨酸 -  谷氨酰胺转移酶  Transglutaminase  EC2.3.2.13  TG)由于能催化蛋白质分子内或分子间的酰基转移反应  通过形成交  联键改善蛋白质的功能性质 产 TG 由于不受季节的限制  在食品工业中具有广泛的应用潜力 分离纯化过程简单 反应速率快  微生物发酵法生 底物特异性低等特  点  更适于广泛应用  本文介绍了 TG 的来源 结构和性质  作用机理和功能  应  用和生产的现状与研究进展  重点进行了产谷氨酰胺转胺酶菌株的筛选  发酵条件  的优化及酶的稳定性  酶促反应动力学曲线等方面的研究  通过大量采取土壤分离  培养  利用凝胶法初测  比色法精测  分 离 得 到 一 株 产 MTG  Microbial  Transglutaminase  的菌株, 找到了一个简便  低廉  快速的筛选技术路径, 并鉴定  出所筛选的菌株为灰色轮丝链霉菌  Streptomyces.griseoverticillatus  利用该方法  对产酶菌株的发酵培养基组成进行了优化  得到的最佳培养基的组合为  g/L  葡  萄糖 20.0 蛋白胨 20.0 酵母抽提物 4.0  MgSO4 7H2O 2.0 K2HPO4 3H2O 2.0  KH2PO4 2.0  以此为发酵培养基 30  发酵培养 3d 时酶活可以达到最大值  添加  0.1%聚乙二醇可以使酶活提高 24.28%  对 MTG 的稳定性研究发现 MTG 具有较好  的热稳定性和 pH 稳定性 在 40 下以及 pH5  9 保存时酶活损失较小  对金属离  子 Mg2+  Ca2+  K+  Mn2+  Fe2+等不敏感  二硫苏糖醇  还原型谷光甘肽对酶的稳  定性作用较大  甚至能提高酶的活力  最后采用荧光法测定了其动力学特征  得到  其米氏常数 K mA =1.96?? 10-5 pH7.5Tris-HCl 缓冲体系中  K mB =2.38?? 10-5 抑制常数 K i = -7.26?? 10-5 在 50mmol/L 酶的活力最高  关键词 微生物谷氨酰胺转胺酶 菌株筛选  鉴定  稳定性  动力学 bstract Transglutaminase(protein-glutamic acid- transglutaminase,EC.2.3. 2.13,TG) could catalyze acyl translation between protein molecular or in the molecular and improve the structure and function of protein by forming crossing bands. It has a wide potentiality in food industry. Fermentative production of transglutaminase has the characteristics of not being limited by seasons, simple procedure of purification, fast reaction rate, low subtrate specificity and so on. So it can be used widely. The paper has introduced the source structure characteristic function catalyze mechanism production and application status of transglutaminase. In this research , the screening of microbial transglutaminase(MTG) producing strain, the optimization of culturing conditions, the stability and kinetics of MTG have been analyzed .Through collecting soil and separated fostering, a transglutaminase producing strain was isolated by the cheap and convenient gel and molorimetry method, a