电场导入1，4，5三磷酸肌醇（IP3）激活小鼠卵母细胞的研究.pdf

电场导入1,4．5．三磷酸肌醇(1P3)激活小鼠卵母细胞的研究 摘 要 研究哺乳动物卵母细胞的激活及其孤雌胚的发育，有利于探索卵母细胞的生理反应， 分析理化激活与精子激活的特征，对阐明哺乳动物卵母细胞的激活、受精和发育机理， 解答这些重要的生命现象及技术的应用具有重要意义。同时也可为核移植的研究提供技 。 术参考。IP3是影响细胞激活的关键因子。乏椟验利用电激活过程中卵母细胞膜上形成的 瞬间孔洞，向卵子内导入一定量的IP3，通过IP3第二信使途径，打开胞内钙库，模仿自 然受精过程中卵母细胞内Ca2+的波动性变化，研究电场导入IP3对小鼠卵子的激活作用。 该法排除了胞质注射IP3时人为因素的干扰，并克服了一次性注射的不科学性，保证了结 果的可靠性。 作为主要实验仪器。首先对影响电激活的诸多因素，如：直流脉冲的强度(1．0kv／cm、 同卵龄卵母细胞的激活率随电场强度、脉宽和激活次数的变化而变化。脉宽和激活次数 不变的情况下，卵母细胞的激活率随电场强度的增加而升高。场强为2．0kv／em时，激活 激活率达到77．78％，显著高于40ll 继续升高卵母细胞的激活率：卵母细胞的激活率也随激活次数的增加而升高，卵子经多 次激活处理后，激活率、卵裂率和囊胚发育率都明显升高，本实验采用3次连续电脉冲 CPO．05)。(3)卵龄对卵母细胞的孤雌激活也有影响，卵母细胞的活化率随卵龄的增加而 显差异(Po．05)。 细胞，可获得较为理想的激活效果。 在电激活参数确定的基础上，本实验利用电场导入IP3的方法激活注射hCG后18．19h 的小鼠卵母细胞，研究了IP3及其浓度变化对卵母细胞电激活效果的影响。结果表明：(1) 内，诱导小鼠卵母细胞的激活。(2)在IP3试验浓度(25．500l-t mol／L)范围内，卵母细胞 u 验表明，激活液中添加适量IP3可提高卵母细胞的电激活率。IP3浓度达100¨．mol／L时， 可有效提高卵母细胞的囊胚发育率。继续增加Ip3的浓度，卵母细胞的激活率和卵裂率无 明显变化。 关键词：孤雌生殖；尘鼠卵母细胞：电激活；1,4，5一三磷酸肌醇(IP3) ‘‘’hⅥ__H一 ， 一… 峨歹 2 皇堑呈垒!：!：!：三壁墼璺壁!!坠!堂适!：垦塑堡塑些堕里窒 ofMouse electrical of Activation The of Oocytesby Study Inositol 1,4，5一trisphosphate(IP3) WangWei and ofAnimal AgriculturalUniversity Sciences，Southwest College Veterinary Chongqing，China，400716 ABSTRACT for from andfor tobe is factorsCa2+torelease IP3oneofthe oocytes