ACE2基因变异与SARS冠状病毒进入及肺部病变严重程度之间的关系研究.pdf

中文摘要 ACE2基因变异与SARS冠状病毒进入及肺部病变严重程度之间的关系 研究 acute 严重急性呼吸综合征(severerespiratorysyndrome， 染病，在人群中传染性极强，其病死率高达lO％。弥漫性肺泡损伤 (diffusealveolar damage，DAD)是导致患者出现呼衰及死亡的主 要原因之一，其发病机制至今尚未阐明。在SARS-CoV被分离后不久， SARS 人们就鉴定出了 受体一血管紧张素转换酶 2(angiotensin—convertingenzyme2，ACE2)。体外研究提示，SARS 假病毒在小鼠和大鼠ACE2基因转染的细胞上其病毒进入效率较人 也可能是大鼠和小鼠对SARS—CoV不易感的原因之一。体内研究显示 SARS—CoV感染小鼠急性期可引起ACE2表达下调；SARS—CoVS蛋白也 可引起ACE2表达下调和急性肺损伤加重，运用ACE2底物抑制剂可明 显减轻急性肺损伤的程度。这些研究充分体现ACE2在SARS发病过程 中扮演了重要角色。但这些研究仅局限于小鼠，尚不足以外推到人。 由我们以前的研究可知，中国恒河猴被SARS—CoV感染后可出现轻度或 重度间质性肺炎。为了进一步明确ACE2在SARS发病中的作用，我们 基因变异与病毒进入之间的关系。我们希望通过对rh—ACE2基因变异 与病毒进入效率之闻关系的研究，从而发现一些与病毒进入密切相关 的氨基酸位点。进焉突变h毯一焱CE2基因的该位点残基，观察其对病毒 进入的影响，希望找到hu—ACE2上对病毒进入有重要影响的氨基酸位 点。最藉我稍将进一步分析rh～ACE2基因突变与SARS病变严重程度之 阀的关系。 本次研究中我们以肺部病理变化为基础，选取6只轻度、6只重 度SARS恒河猴及2只正常对照恒河猴作为研究对象。轻度肺损伤的病 理特征为肺闻隔增宽伴单核巨噬细胞浸润；重度肺损伤以弥漫性肺泡 损伤为其特征，主要病理特征为弥漫性肺间隔增宽伴单核巨噬细胞浸 润、局部肺闻隔融合、肺泡腔内可见蛋白水肿液及纤维素渗出。运用 Rl—Pe冀从这些恒酒猴肾组织中扩增出全长曲一焱CE2基因，克隆并分辑 其变异规律。序列分析结果提示，在14只恒河猴中，我们共检测到 55个隧机非同义突变。以序列相对保守的8号恒河猴的8—2克隆为 中共查及38个～致性非同义突变。每只恒河猴选取2个代表性质粒转 染HEK293，r细胞后，观察基因表达水平及病毒进入效率的变化。结果 发现至王号恒河猴圭王一?克隆的袁eE2表达水平和病毒进入效率较量圭一盖 克隆明显降低。序列分析结果提示，与l卜l克隆相比，ll一?克隆出 起曲一矗eE2基因羔王一?克隆蛋童表达和病毒进入降低的关键牲氮基酸位 伤严重程度之间的关系。结果显示：有王只(1／6)轻度病变的恒河猴 杂合性位点。Fisher确切概率法检验提示，轻度和重度SARS恒河猴 ACE2基因第1677位核营酸位点A／G杂合率未见明显差异。 实验结果初步提示，中国恒河猴不同个体间rh—ACE2基因氨基酸 的严重程度无明显相关。该研究将为设计针对ACE2的靶向药物及进一 步理解ACE2在SARS发病中的作用提供一些线索。 关键词：血管紧张素转换酶2；严重急性呼吸综合征；SARS冠状病毒； 弥漫性肺泡损伤；基因变异 ABSTR忍冀 of SARS—CoV geneVariants， Stlldyrelat主onshipa戳ong轰CE2 and of lesions pseudovirusentry， severitypul蟹on氇ry Severeaeute isanacute syndrome(