A型流感病毒非结构蛋白NS1与PI3K调节亚基P85β蛋白相互作用研究.pdfVIP

中文摘要 摘 要 磷脂酸肌 醇一3 激酶 (phosphati勿 linositol3一k inase，p I3K ) 是在众 多被激活信 号 通路 中起 到枢 纽作用 的关键 蛋 白分子 。P I3K 不但 参 与调节 早 期 A 型流感病毒进 入细 胞 的过程 ，而且 它 的激 活还将 导致 感染后 期细胞凋亡被抑制 ，后 者功 能 的实 现 则依赖于流感病毒非结构 蛋 白 N SI 的表达 。 已被证 实 ，P I3K 调节亚基 P 85p 与 N SI 蛋 白的直接 相 互作用 能导致 P I3K 的激 活 ，参与 次相 互作用 的位 点是 N sl 蛋 白的效应 区 以及 P 85p 蛋 白的 iSH Z 和 SH 3 区域 。但 是 ，N SI 结合 P S邓 蛋 白导 致 PI3K 被激 活 的具体机制 尚不清 楚 ，因此 ，如果可 以得到 N sl 与 P S邓 蛋 白的 复合物 晶体 结构 ，从而在三维 空 间结构上 定位 出蛋 白间相互作用 的关键氨基酸 ， 并解 释 这 种相互 作用所 导致 的 PI3K 激 活机 制 是一种潜 在 的行之 有 效 的方 法 。 在本 文 的实验 中，我们 克 隆并表达 H SN I 株 N SI 效应 区蛋 白以及 P 85p isH Z 和 SH 3 区域 的蛋 白，重 复验 证 这些 区域 的相 互 作用 ，结果表 明只有 P 85p 的 isH Z 区 域跟 N SI 效应 区存 在直 接 的相互作 用 ，而 P 85p 的 SH 3 区域 并不与 N sl 效应 区蛋 白相 结合 。在证 明这 种相 互作用 没有亚 型 的特 异性后 ，我们用各 种 生化方 法 纯化 出N S I 和 P 85p 蛋 白及其 蛋 白复合物 ，并用坐滴 结 晶的方法筛选 并优化 结 晶 条件 ，优 化 结 晶条件 的工作还 在 继续进 行 中 。 关键 词 : N sl ; P S邓 ; 相 互作 用 ; 蛋 白复合物 A B S T R A C T A B S T R A C T P hosPhatidy linositol一3一k inase (P I3K ) 15 a key sign aling m ediator that 15 activated by In flu en za A v iru s. In faet，P I3K no t on ly regu lates a v ery early stPe durin g v iral en try b u t a lso resu lts in suP P ressio n o f P rem aut re ap oP to sis at later stag es o f in feetio n . T h e latt er fun ctio n 15 d eP en d en t o n the eXP ressio n o f the v iral n o n 一stru eturalP rote in 一l (A /N 5 1). It has been show n that P I3K activation oeeurs 勿 direet interaction of A /N 5 1 w ith the P 85p regulatory subun it and interac tion sites of A /N 5 1 and P 85p h av e n o w b een m aP P ed in d eta il，th at are th e effe cto r d o m a in o f N S 1 P ro te in an d th e iSH Z and SH 3 dom ains of the P 85p Protein .H ow ever，the w ay of how the P I3K