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英文文献翻译 人脐带华通胶间充质干细胞分化为神经样细胞 MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu, YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-hua 关键字：华通胶、间充质干细胞、分化、神经细胞、丹参 背景：骨髓间充质干细胞（MSCs）的两个最基本的性质是无限的自我更新的能力以及分化成多种功能细胞和组织的能力。人类脐带华通胶细胞具有骨髓间充质干细胞的性质并且代表着原始细胞的一个丰富的来源。进行这项研究是为了探索诱导人脐带华通胶间充质干细胞分化成神经样细胞的可能性。 方法：培养来自足月正常分娩的婴儿脐带华通胶骨髓间充质干细胞。丹参、β-巯基乙醇作为诱导剂用来诱导人脐脊髓源性骨髓间充质干细胞分化。神经标记蛋白的表达是通过免疫细胞化学来显示。诱导过程通过相差显微镜，电子显微镜（EM），激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）监测。基因多效蛋白和巢蛋白基因通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来获得。 结果：来自人脐带华通胶的间充质干细胞很容易获得，保持和扩大培养。其骨髓间充质干细胞的标记物表达呈阳性，但造血干细胞和移植物抗宿主病（GVHD）相关的细胞标记物表达呈阴性。丹参作用后可使华通胶细胞发生深刻的形态学变化，诱导骨髓间充质干细胞发展成具有多个突起样的圆形细胞体。最终，通过它们发生所构成的网络过程使人联想到神经元的原代培养的过程。丹参、β-巯基乙醇也可以诱导骨髓间充质干细胞表达巢蛋白，Ⅲβ-微管蛋白，神经丝蛋白（NF）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。RT-PCR分析证实骨髓间充质干细胞在被丹参诱导之前和之后均可表达多效蛋白。只是诱导之后其表达明显增强并且巢基因也被表达。 结论：骨髓间充质干细胞可以从人脐带华通胶中分离。通过丹参或β-巯基乙醇诱导它们能够分化成神经细胞。这个诱导不仅使骨髓间充质干细胞发生形态变化，而且使其表达神经元相关基因和神经元细胞标记物。在中央神经系统细胞移植中，它们可能代表着干细胞的一个额外来源。 在人脐带血中的骨髓间充质干细胞（MSCs）是多能干细胞，它不同于造血干细胞。最近一个关于把来源于人脐带血的单核细胞转分化成神经细胞的报道引起了研究者们对于它们的临床意义以及它们在中枢神经系统的细胞移植中的重要性探索的兴趣。因此，人类脐带华通胶中含有可以增殖、分化为神经细胞（神经元和/或神经胶质细胞）的多能祖细胞的假设可以被证实了。 方法 细胞培养及主要试剂 本实验中使用的人脐带血华通胶是在汕头大学医学院附属第二医院从足月正常分娩的婴儿体内收集到的。丹参是由中国上海中西药业有限公司提供的。Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM），N2介质，胎牛血清（FBS）和1%谷氨酰胺是从美国GIBCO公司买来的。 表皮生长因子（EGF），碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），β-巯基乙醇，β-微管蛋白，神经丝（NF），胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和PI值是从美工Sigma Co公司购买的。巢蛋白，链霉亲和素-生物素-抗生物素蛋白复合物（SABC）和异硫氰酸荧光素（FITC）耦合的抗小鼠免疫球蛋白G（IgG抗体）抗体是在中国博士德公司购买的。法国Ancell有限公司提供下列试剂：CD29，CD44，CD59，CD14，CD34，CD45，CD33，CD38，CD80，CD86，CD117，CD40，CD40L。Trizol试剂由美国Invitrogen公司提供，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）材料都是由日本TaKaRa公司提供的。 华通胶被收集并切成约1.5-2.5mm的薄片，在24h内处理加工、培养。这些薄片被放在一个6孔培养板并在含10%胎牛血清的DMEM中培养。此培养基中含有：10％’-CCAAAGCCAAGAAAGGGAA G-3’，反向引物为: 5’-TTTATTGGGGGGAAAAAGTCAG-3’（342 bp）。而它的变性温度为52℃。β-肌动蛋白作为各个反应中的内部参照物，它的上游引物为：5’-TGGCACCA CACCTTCTACAATGAGC-3’和下游引物为：5’-GCACAGCTTCTCCTTAATGTCACGC-3’（396 bp）。 结果 骨髓间充质干细胞的培养 华通胶被切成片并在DMEM培养基中培养。5-7天后，细胞生长呈扁平单层，当细胞继续生长并融合在一起后，能够呈现出成纤维细胞的形状（图1），并有不同尺寸的球形细胞团形成。原代培养的时间一般为10-14天。传代后，细胞能够在3-5天内增殖4-5倍，但经过9次传代后其增殖率会有所下降。 细胞识别 利用流式细胞仪分析研究第三和第八代的骨髓间充质干细