白血病多药耐药相关基因的研究.pdf

的抗性，是典型的MDR细胞。以往的研究发现，m出1基因和P-gp在这两种细胞 中高表达，是这两株细胞产生MDR的主要机制，但P-gp的表达尚不能完全解释其 MDR现象。因此，对这两株耐药细胞的进—步研究不仅有助于阚明其MDR发生机 制，更重要的是可能为白血病MDR机制的研究提供新线索。) 本课题先用SSH技术分离、克隆耐药白血病细胞株(K562／DOX)及敏感细胞 株(K562)之间差异表达的基因，然后对克隆到的一些基因作表达和功能方面的进 一步研究，以期发现白血病MDR发生的新机制。 参?一|。j 第一部分 K562／DOX和K562细胞间差异表达基因的分离和克隆， 【浙江大学肿瘤研究所建立的多药耐药白血病细胞株K562／DOX对多种化疗药物 具有耐药性，是典型的如R细胞株。以往的研究标明mdrl基因和P-gp在这株细胞 中高表达，是其MDR发生的主要机制，但不是唯一机制。支 的基因片断，并通过T／^克隆方法将差减杂交产物转化大肠肝苗，共获得了200余 个克隆。对其中80个克隆进行扩增，提取质粒鉴定，发现73个克隆有插入片断。 实其中14个克隆在K562／DOX细胞中高表达。时这14个克隆进行DNA序列测定， 因，分别是： 1．线粒体基因(Human mitochondria嗣【lecompl咖genorne) NADH subunit 2．NADH脱氢酶亚单位2基因(Human 2．ND2) dehydrogenase 3．电位依赖性阴离子通道3(VDAC3)基因(Humananion voltage-dependent channel3) ribosomal 4．s3核糖体蛋白基因(s3 protein,S3rp) 5．核糖体蛋白(L7a)基因(Humanribosomal聊)teinLTa) 6．铜，锌超氧化物岐化酶(SOD)基因(HunmnCu／Zn sup∞oxidedismutase) 1-8u 7．干扰素诱导基因1-8u(Human imerferon-indueible gene宜om gene family) 8．血红蛋白zeta基因(Humanhemoglobinzeta) 2 9．S期激酶激活剂基因(Humanactivatorofspha辩kinase) leukemia-associated 10．白血病相关磷蛋白基因(Human phosphoprotein) (LAPl8)(Stathmin)) II．My023基因 以上基因产物中，除铜，锌超氯化物岐化酶(SOD)、线粒体与肿瘤耐药的 关系较明确外，其它基因在肿瘤耐药中的作用目前尚无定论。但分析结果表明， 这些基因可能与肿瘤MDR的发生有一定关系，可能代表了多药耐药的新机制。 这些基因有可能分别在MDR发生过程中的不同环节起作用，比如线粒体为P-印 第二部分 S3rp、ND2和My023基因在不同自血病细胞株中表达的研究 ／在11个差异表达基因中，三个基因特别引起了我们的注意，分别是s3核糖体 蛋白是一种多功能的蛋白，具有多种DNA修复酶的活性，与DNA的损伤修复有关， 但在肿瘤MDR形成中的报道尚未见报道。NADH脱氢酶在线粒体氧化磷酸化过程