肠球菌性羔羊脑炎发现及其病原特性和诊断方法研究.pdf

中文摘要 肠球菌性羔羊脑炎的发现及其病原特性和诊断方法研究 博士研究生：周霞 指导教炳：程安春教授 汪铭书教授 剡根强教授 霆弼农盈大学(嚣jl|雅安，625014) 肠球菌是动物和人类派常菌群的重要组成部分，多作为有益菌进行研究。然 蠢套骚究袭暖，在懿氧革兰辍经球麓孛，它是仅次予甍萄璐麓毂重要陵走感染致 病菌。美阑医院感染监视系统(NISS)已将其列为引起医院黪染的第二大病原菌。 最近几年麟疆生产建设兵黧部分援模化羊场连续焱露～季第发生～耪鼓20一∞ 日龄羔羊神经症状和败血瘢为主要癍状和瘸变特征的传染性疾病，羔羊的病死率 意遮20％发右，经瘸原分鬟茶定窝爨魍试验确诊燕嬲球莲歇致羔羊脑炎，这楚羔 羊的一种新的疾病，本文围绕该病的病原特性和诊断方法开展了系列研究，以期 为阐明肠球蕊对羔羊的致瘸援理蟊蠢效防派该病提供秘学数握，缝莱如下： 1．肠球菌性羔羊脑炎的发现及其病原分离撩定：自2002年新疆生产建设兵团部 分蝮模化誓场连续尼年在冬季产羔攀节发生了一静病程馒嫒，无晶蕈孛差异，主要 感染羔羊、可引起死亡的、以败血瘢和神经症状为燕要特征的传染病。先后从不 冠羊场发擞弦炎瘥状的羔攀傣走分褒至《ll株细楚，经形态举、墙莠特性、耋E纯 反应、血清学以及幼物试验确定是由肠球荫属的某些种引起。 2。检测羔苇瑟球萤蛙脑炎阅接ELISA方法建立和初步应恩：到用超声波裂鳃铡餐 致羔羊脑炎粪肠球菌裂解物作为抗原包被酶标板，应用棋盘滴定法，通过条件筛 选成功建立了致羔羊肠球麓摅体测定的闻按ELISA方法。应用该方法检测羔羊肠 球菌阳性舰清，其灵敏度鼹微量凝集反应的25—100倍。利用建立的方法检测来自 寒免疫羊场匏50{{}成年羊搬渍和30份羔羊搬涛，结果显示蠢2傍成年羊盘瀵呈阳 性。 3。检测羔攀躁球蘸性齄炎PCR方法建立移拐步应爱：鞋致羔羊脑炎粪骚毽夔基因 组为模板，以相对保守的肠球菌的tuf基因为基础设计一对引物，通过条件筛选 成功的建立了用于致羔羊藤炎肠球落快速诊敷的PER方法，其灵敏发在lOfg。应 用该方法梭测自然感染羔羊和人工感染发病死亡羔羊以及人工感染发病歹医亡小 鬣圭簧器官缝织，繇在心、群、脖、鬻、脑、耱脊液等缀织孛均捡溺到了瑟臻麓 DNA，其中2只人工感染死亡羔羊还在肺门淋巴结和肠累膜淋巴结中检测到肠球菌 ’ DN矗。 4．免疫组化梭测羔羊粪肠球菌性脑炎及其抗原定位的研究：以导致羔羊脑炎的粪 弱球蘩为研究蹲象，入工感染夸鬣，遴遂条俘饶纯，建立7秘球菌性羔羊弦炎羧 测的间接免疫组化方法。用该方法定期检测粪肠球菌税试验小鼠体内的分布，结 采委嚣：4h野可在，l、鬣静翳簸串裣溅翻粪瑟球藩静阳程鬏裢；14h霹纛鹜蓬耱一貉 脏中检测到阳性颗粒；18h可在食道中检测到粪肠球菌阳性颗粒；20h在脑中梭 瓣到潮悭颗鞍；22h程§奉麓和气管孛检测嚣粪耢球菌戮往鬏裁；24h霹在除薅簸 外所有受检缎织即脑、肝、心脏、肾、气管、肺、食道及小肠中观察到粪肠球菌 豹阳馁颗粒。 5．致羔羊脑炎肠球菌毒力因子的分予流行病学调查：对1l株致羔羊脑炎肠球菌 任筒～种。专久类医学其它采源瑟球蕹毒力戮子携带穗嚣不鬻， 6．致羔羊脑炎粪肠球菌8种海力因予基因片段克隆和序列特征研究：将致羔羊 性交溪舞逶行序疑溅定。逶j毫BLAST较l孛对羲羔羊藏炎粪瑟球蘩各毒力基因扩攒 片段的测定序列与GeneBank公布的医学l临床分离株相应序列进行同源性分析比 较，结采显承掰秘来源8释毒力霞予蘩因薯麓冀段痔列翡羁潦缝分裂羚99，3甍、 1％。 99．56％、99．3％、97，85％、96．64％、99．9％、99．29％和98．1 7．致羔羊藏炎弱球蘩与箍康健瘫羔苇分离豹赫球蓉雯凌学特键豹琵较磅究：遴 过研究发现羔羊两种来源肠球菌的培养特性和生化特性基本一致；对某些抗生豢 有不黼程凄豹辩芬煎；致痣抹有更多熊毒力戮子缝会；瓣琵者筵有豹霉力霾予蓬 因片段进行克隆与序列分析，并同时与GeneBank来自医学临床分离株相应毒力因 子基鬻片羧魄薄分辑，其嗣潦经缀蕊，魏在95篱良I-。爱零蘸群拣不栽弓l超小躐 的死亡，而致病株可导致小