海洋真菌灰绿青霉IIUC5菌株抗肿瘤活性物质的初步研究.pdf

摘 要 近年来，海洋天然产物的研究一直是国内外研究的热点领域。筛选活性物质 为海洋药物提供先导化合物是目前海洋天然产物研究的重要组成部分。本文进行 了海洋抗肿瘤活性菌株的筛选，海洋真菌 HUC-5 抗肿瘤活性化合物的初步分离 及其抗肿瘤机理的研究。 对本实验室的 26 株海洋真菌，采用 MTT 法进行了抗肿瘤活性筛选，有 9 株菌具有较强的体外抗肿瘤活性（≥50%），占总供测菌株的 34.6%，其中有 6 株 对宫颈癌 Hela 细胞有抑制活性，对小鼠肾上腺嗜铬瘤细胞 PC-12 细胞有抑制作 5 2 Hela PC-12 HUC-5 用的共 株。另外，有 株对 、 细胞株均有抑制活性，对 菌株进行了菌种鉴定、发酵液的乙酸乙酯提取物进行了部分理化性质检测，并对 乙酸乙酯提取物及其初步纯化产物的抗肿瘤活性进行了初步研究。 对菌株 HUC-5 进行了形态学鉴定，根据其菌落形态、产孢结构等形态特征， 初步鉴定该菌为灰绿青霉（Penicilliumglaucum）。 对菌株 HUC-5乙酸乙酯提取物部分理化性质的研究结果显示，与常温对照组 40-50 80 相比，该菌的乙酸乙酯提取物在 ℃ 左右保持较好的活性，温度 ℃ 时活 性下降66%，90℃ 时仅保持 22.6% 的活性，在 100℃ 及以上温度时活性完全丧 失。对该菌发酵液中抗肿瘤活性物质的溶解性质测定表明，活性成分溶于乙酸乙 酯、甲醇等有机溶剂，其中在乙酸乙酯中溶解性最好。 对菌株 HUC-5 乙酸乙酯提取物的抗肿瘤作用研究表明，HUC-5 乙酸乙酯提 取物具有广谱的抗肿瘤细胞活性，对Hela、小鼠黑色素瘤细胞 B-16、人乳腺导管 BT474 Hep-2 PC-12 Hep-2 癌细胞 、人喉癌 、 均有抑制活性，其中对 肿瘤细胞抑 制性最强，在0.4 mg/mL浓度下，达到96.7%，且抑制作用具有时间和剂量依赖性， IC 为 0.12 mg/mL。镜检发现处理的 Hep-2 细胞在形态表现为染色质浓缩，细 50 胞收缩，及类似凋亡小体。通过彗星电泳实验结果显示，0.4mg/mL乙酸乙酯提取 物对 Hep-2 细胞 DNA 有重度损伤；琼脂糖凝胶电泳结果显示出典型的 DNA ladder；流式细胞术检测结果表明，在分别处理 16 h，32 h 时，Hep-2 都有明显 的细胞凋亡，凋亡率分别为 45.85% 和 86%。菌株 HUC-5 乙酸乙酯提取物主要 通过诱导 Hep-2 细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的增殖。 通过 Sephadex LH-20 柱色谱初步分离抗肿瘤活性成分，并检测其抗肿瘤活 5 15.65% 10.69% 性，结果显示有 组成分抗肿瘤活性相对较高，活性分别为 、 、 14.48%、16.99%、18.11%。 关键词：海洋灰绿青霉，抗肿瘤活性，菌种鉴定，提取物 I Abstract Abstract AAbbssttrraacctt The research of marine natural products has been a hot field in china and abroad. Screening bioactive marine natural products is another impo