红细胞膜生物色谱法的建立及其在当归效应物质研究中的应用.pdf

The membrane and chromatography development bioa．Emity oferythrgcytes its inRadix Sinensfs applica[iOnAngelicaeanalysis 中文摘要 归是常用补血活血中药。现代研究表明，当归具有抗血栓形成、 抗血小板聚集、促进血浆纤维蛋白溶解、改善血液循环、抗心律失常、 改善冠脉循环、降血脂等多种药理作用：当归中的阿魏酸等有效成分能 明显促进血红蛋白和红细胞的生成，但是阐明当归效应与化学成分之问 的关系一直是一个难题。 药物是通过药物分子与生物大分子如受体、酶以及通道等靶点相互 作用而发挥效应(或产生毒性作用)的。本文第一部分首先尝试制备红 细胞膜包被的硅胶载体固定相，然后将此固定相装柱，在线检测当归水 提液的乙酸乙酯部位、正丁醇部位和剩余水捉液在红细胞膜包被的硅胶 载体固定相色谱柱上的色谱行为，结果发现当归水提液的乙酸乙酯部位 在此色谱柱上有较多的组分被保留下来，采用HPLC／MS联用技术鉴定 出10个化合物。这一方法同时也发现难以既顾及到红细胞膜所需要的 温度、压力、离子强度及溶液pH等要求，又考虑到色谱分析所需要的 压力、流动相及无机盐离子等要求，特别是非特异性结合的阃题。 第二部分的工作是解决既满足硬红细胞膜靶点保持生物活性的要 ＼／ 求，又满足色谱分析条件的问题。．埯文首先用非线性梯度对当归水提液 ／ 的指纹图谱进行了研究，研究表明最佳检测波长为254nm、280nm及 谱，作为红细胞膜色谱法研究的基础。 在模拟机体内环境的条件下，让红细胞膜与当归水捉液特异地结 合，然后用磷酸盐缓冲液(pH7．4)沈掉未被红细胞膜特异性结合的成 分，最后用pH4洗涤液沈出与红细胞膜特异性结合的部分，将该保留 液按色谱要求进行色谱分析，发现主要有四个特征成分被红细胞膜特异 l The mcmbmne and ofcrythrocytcsbioaffmitychro_matography development —its inRadix Sinensis applicationAngelicaeanalysis 性结合，并得出这四个特异性结合成分的特征峰。在此特征峰的指导下， 我们对此特征峰进行了分离与鉴定。 将当归水提液分别用乙酸乙酯和正丁醇萃圾，得到乙酸乙酯部位、 正丁醇部位及剩余水提部位，与上述特征峰比较发现被红细胞膜选择性 结合的四个特征成分主要在乙酸乙酯部位。采用制备HPLC进一步制备 得到两个化合物，用紫外(UV)、质谱(MS)及核磁共振仪(NMR) 进一步鉴定表明与红细胞膜选择性结合的主要是阿魏酸、洋川芎内酯H 和洋川芎内酯I。 红细胞变形性实验表明，一定浓度的阿魏酸(10-4 10‘1M)、洋川芎 内酯H(O．1M和O．01M)及洋川芎内酯I(0．1M和O．01M)能明显减 M 轻ConA导致的红细胞变形性损伤。红细胞聚集性实验表明，10一～10‘1 阿魏酸、洋川芎内酯H及洋川芎内酯I能明显降低红细胞聚集性。 、， 关键词：当归、红细胞膜色谱法、指纹图谱、特昂槎结合、阿魏酸、洋 川芎内酯H、洋川芎内酯I Abstr