银屑病角质形成细胞凋亡与Fas-FasL表达的关系.DOCVIP

临床医学论文-银屑病角质形成细胞凋亡与Fas/FasL表达的关系 【摘要】? 　　目的 探讨银屑病皮损中角质形成细胞（KC）凋亡与Fas/FasL表达的关系。 方法 免疫组化ABC法对银屑病患者皮损中Fas、FasL表达进行检测，TUNEL法检测皮损中KC凋亡情况。 结果 银屑病皮损中既可表达Fas，又可表达FasL,而在正常皮肤不表达；患者皮损中KC发生凋亡的比例明显高于正常对照组（P＜0.01），但病程的不同阶段其细胞凋亡指数（AI）不同，进行期高于静止期。 结论 KC凋亡参与了银屑病的发病过程，Fas、FasL对角质形成细胞凋亡有调节作用。 【关键词】? 银屑病 角质形成细胞 细胞凋亡 Fas FasL 　　【Abstract】? Objective? To study the relationship between keratinocyte(KC) apoptosis and expression of Fas/FasL in the lesions of psoriasis. Methods? Apoptosis of KC were measured by TUNEL. Immunohistochemical technique-Avidin biotin comples (ABC) were employed to syudy the expression of Fas,FasL in the lesions of patients. Results?Both Fas and FasL were expressed in the lesions , and no expressed in normal skin.The higher frequency of apoptosis KC was obseverd in progressive stage of psoriasis lesions,and the frequency reduced in static stage psoriatic lesions and normal skin（P＜0.01）. Conclusions? There may be a close relationship between the development of psoriatic lesion and apoptosis of KC. Fas/FasL might be involved in the pathogenesis of psoriasis. 　　【Key Words】? psoriasis? keratinocyte? apoptosis? Fas? FasL??? 　　近年来银屑病发病与细胞凋亡的关系逐渐受到重视，Fas/FasL是现今研究较多、较为重要的细胞凋亡相关基因。作者应用免疫组化和TUNEL法对银屑病患者皮损中Fas、FasL的表达和皮损中角质形成细胞凋亡进行了检测。结果报告如下 　　1? 对象和方法 　　1.1? 研究对象? 寻常型银屑病26例，其中男14例，女12例，年龄15～65岁(平均28.5岁)；进行期13例，静止期13例；病程6个月～16年(平均8.3年)。正常对照组10例来自整形外科正常皮肤，其中男6例，女4例，年龄18～51岁(平均25.8岁)。两组患者年龄、性别无统计学差异,具有可比性。 　　1.2? 试剂? 细胞凋亡检测试剂盒、Fas、FasL兔抗人多克隆抗体（工作浓度均为1：150）购于北京中山生物技术有限公司，用试剂盒附带的肺癌石蜡切片为阳性对照，PBS液代替一抗作阴性对照。 　　1.3? 方法? (1)免疫组化：石蜡切片(约4μｍ)常规处理后，微波炉抗原修复，依次加入稀释的一抗、生物素标记二抗、SABC，DAB显色、苏木素复染。结果按着色强弱分级：无着色为0，浅黄色为1，深黄色为2，棕黄色为3。着色范围以在×40倍镜下随机选取5个视野（每个视野计数100个细胞）计数阳性细胞所占的百分比均值，25%为1，25%～50%为2，50%为3。上述两项相加即为Fas、FasL表达强度积分，2为阴性，≥2＜3为弱阳性（+），3～4为阳性（++），4为强阳性（+++）。(2)TUNEI染色：切片脱蜡入水,蛋白酶K消化15min,置体积分数0.03的H2O室温处理20min,标记缓冲液湿盒中37℃孵育60min,1:50稀释的亲和素-辣根过氧化物酶37℃孵育30min,DAB显色液显色10min,苏木素复染,镜检，细胞核中有棕黄色颗粒者即为凋亡阳性细胞，在每张阳性片随机取5个阳性细胞最多的高倍视野（×400）计算凋亡指数（AI）。 　　1.4? 统计学分析? 采用SPSS 12.0软件包处理，样本表达强度比较用秩和检验，细胞凋亡