诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达.DOCVIP

临床医学论文-诱导型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子在舌癌细胞株中的表达 ??????????????? 作者：曾曙光， 陈伟良， 杨 岚， 邱钧琦 张积仁， 章锦才 艾伟健， 郑俊发? 【摘要】? 【目的】 探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF） 在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达，为进一步研究iNOS和VEGF在舌鳞癌肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。【方法】 采用逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)法和SP免疫组化方法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中iNOS和VEGF mRNA 和蛋白表达情况进行检测。【结果】 RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中iNOS\VEGF mRNA条带明显，SP免疫组化检测到iNOS\VEGF蛋白在舌癌细胞胞浆中呈强阳性表达。【结论】 iNOS\VEGF mRNA 和蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞株中呈高水平表达。 【关键词】? 诱生型一氧化氮合酶； 血管内皮生长因子； 舌； 肿瘤 ??? Abstract:【Objective】 To investigate the expression of inducible nitric oxide synthase ( iNOS) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in Tca8113 and provide basement of experiment for further study on the role of iNOS and VEGF in tongue carcinoma angiogenesis. 【Methods】 iNOS and VEGF? mRNA and protein were detected by RT-PCR and SP immunohistochemistry. 【Results】 The band of iNOS and? VEGF mRNA were obvious and the expression of iNOS and VEGF protein were strongly positive by immunohistochemistry in Tca8113 cells. 【Conclusion】 There were overexpression of iNOS and VEGF mRNA and protein in Tca8113cells. ??? Key words: inducible nitric oxide synthase; vascular endothelial growth factor; tongue; neoplasms ??? [J SUN Yat-sen Univ(Med Sci), 2007, 28（5）:520-523]????? 一氧化氮（nitric oxide, NO）是生物体内一种小分子气体。近期的研究发现NO同时也参与包括肿瘤在内的许多病理过程。内源性NO是由一氧化氮酶（nitric oxide synthase, NOS）以L-精氨酸为底物氧化合成的。生物体内的NOS至少有3种类型，其中诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase, iNOS）主要由活化的巨噬细胞，肿瘤细胞诱导产生，作用缓慢而持久，其产生的NO量也较多[1]。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）是由正常细胞或肿瘤细胞产生的。近期的研究表明[2]： iNOS和VEGF在头颈肿瘤中高水平表达，由iNOS诱导产生的NO在肿瘤血管的形成中起着关键的信号传导作用，并调控VEGF，共同促进肿瘤血管的生成。舌鳞癌是口腔最常见常见的恶性肿瘤，iNOS和VEGF是否共同促进舌癌肿瘤血管生成，尚不甚清楚。我们采用逆转录-聚合酶链反应(RT -PCR)法和SP免疫组化法对舌癌细胞株Tca8113细胞株中iNOSVEGF mRNA和蛋白表达情况进行检测, 为探讨iNOS和VEGF 在口腔癌肿瘤血管生成中的相互作用奠定实验基础。 ??? 1?? 材料和方法 ??? 1.1 　 细胞的来源及培养 ??? 将冻存的舌鳞癌Tca8113细胞株(由上海交通大学第九人民医院何荣根教授惠赠)复苏后，置于含10％胎牛血清(杭州四季青)的DMEM低糖培养基(美国Gibco公司)，37 ℃，5％CO2恒温细胞培养箱中培养。每隔3～4 d传代一次。掌握Tca8113细胞株基本生长规律。 ??? 1.2 　 所用材料及设备 ??? 细胞培养所需1640购自Gibco公司,含0.2%EDTA的0.2%的胰酶购自sigma公司。提取总RNA