人肺癌细胞的STAT3信号传导途径的研究.docVIP

摘  要  目的: 以人肺腺癌 A549 细胞株，A549/CARP 耐药株为研究对象，采用免疫 组化法和免疫印迹法（Western Blotting）分别测定 A549 及 A549/CARP 中 信号传导和转录活化蛋白 3（STAT3）、肺耐药蛋白（LRP）、多药耐药蛋白（MRP） 的蛋白表达情况，探明 STAT3 与肺癌细胞增殖分化、抗凋亡作用与耐药之 间的关系。方法: 以不同浓度卡铂诱导 A549 产生细胞耐药株,MTT 法检验 其细胞耐药性，采用免疫组化实验检测 A549 和 A549/CARP 细胞中 STAT3、 LRP、MRP 表达情况；分别提取 A549、A549/CARP 细胞胞浆蛋白和核蛋白， 通过 SDS和 Western Blotting 试验鉴定 STAT3、LRP、MRP 的表达蛋 白。结果: 成功诱导了 A549/CARP 耐药细胞株。免疫组化结果示A549 组、 A549/CARP 组 STAT3 阳性细胞数分别为 146.53±23.41 和 166.73 ±43.06 （P0.05），二者无显著性差异；A549 组、A549/CARP 组 LRP 阳性细胞数 分别为 119.93±42.10 和 172.67±44.89（P0.01），二者有显著性差异； A549 组、A549/CARP 组 MRP 阳性细胞数分别为 112.40±35.07 和 151.73 ±33.92（P0.01），二者有显著性差异；STAT3 与 LRP 无相关性 （r=-0.321,P0.05）、STAT3 与 MRP 无相关性（r=-0.254,P0.05）；LRP 与 MRP 表达间无相关关系（r=0.061,P0.05）。Western Blotting 实验证实 在 A549 组、A549/CARP 组胞浆内有 STAT3 的表达，二者无显著性差异，未 检测到 LRP、MRP 的表达。结论：A549/CARP 耐药株的建立可作为寻找和 筛选抗耐药肿瘤药物的模型；STAT3 在 A549 与 A549/CARP 两组中表达均 增加，提示 STAT3 参与了 NSCLC 的增殖分化和抗凋亡作用；同时 A549 与 A549/CARP 的表达无显著性差异则提示 STAT3 并未参与介导 NSCLC 的耐药； LRP 在 A549 中表达增加，在 A549/CARP 呈高表达；MRP 在 A549 中表达增 加，在 A549/CARP 呈高表达；提示 LRP、MRP 均参与了诱导 NSCLC 的耐药， 但二者之间无相关性；STAT3 与 LRP、MRP 的表达无相关性，提示 LRP、 3 MRP 介导的耐药机制与 STAT3 信号传导途径无关；活化的 STAT3 对肿瘤细 胞的形成、生长、凋亡抑制等过程起着重要的调控作用，因此可通过破坏 STAT3 信号传导来控制肿瘤细胞的生长和增殖,为肺癌的治疗提供以 STAT3 为靶向的基因治疗。 关键词：肺癌；耐药细胞株；信号传导转录活化蛋白；多药耐药蛋白； 肺耐药蛋白；免疫组化；蛋白印迹 4 Study on Signal Transducer Pathway of  STAT3  in Human Lung Carcinoma Abstract: Objective：By studying the expression of signal transducer  and activator of transcription 3,lung resistance-related protein  and multipl  e resistance protein in A549 and A549/CARP and their correlation,to eluci date the role of signal transducer and activator of transcription,lung resista  nce-related protein  and multiple resistance protein in hyperplasia and diff  erentiation,anti-apoptosis and drug resistance of lung carcinoma, and the re  lationship  among  signal transducer and activator of transcription 3,lung  resistance-related protein  and multiple resistance protein. Methods:CARP-  resi