Hoxc13基因在绒山羊皮肤中的表达规律及体外功能分析.pdf

摘 要 绒山羊是重要的毛用经济动物，其绒毛的生长发育受多种因素影响。 Hoxc13已被证实可以直接调控两类毛发组成蛋白（角蛋白与角蛋白关联蛋白） 的表达，且Hoxc13功能的获得和缺失都会形成脱毛型小鼠。本论文主要研究 了绒山羊毛囊发育不同阶段，皮肤中Hoxc13的表达规律；同时研究了过表达 Hoxc13基因对体外培养的皮肤细胞中HFDRGs的影响；另外通过分析埋植/添加 褪黑激素与对照组之间HFDRGs的表达变化情况，了解褪黑激素对HFDRGs的作 用。 本研究共得到以下几点结论： 1、本研究克隆了绒山羊Hoxc13基因，序列长7.2 kb，包含2个外显子、1 个内含子，基因登录号EU839660，CDS长990 bp，共编码330个氨基酸。通过 分析3个纲17个目的28个脊椎动物Hoxc13基因及其推定的氨基酸序列，发现 Hoxc13基因在非哺乳动物向哺乳动物进化过程中出现了1次基因插入，插入序 列为富含甘氨酸的低复杂区域（Low-Complexity Region，LCR），该区域的长 度在哺乳动物中发生了分化（10-28个氨基酸的变异）。哺乳动物Hoxc13基因 出现了适应性进化，可能与被毛的起源有关。 2、绒山羊皮肤中Hoxc13基因的表达量与胎儿时期皮肤厚度的变化趋势相 一致；在成年绒山羊皮肤中，Hoxc13基因的表达量与次级毛囊活性周期显著 相关（R=0.837, p0.001)；埋植褪黑激素可以提前绒山羊皮肤中Hoxc13的表 达，且显著上调8-10月份皮肤中Hoxc13的表达量。在体外，褪黑激素对绒山 羊皮肤细胞中Hoxc13基因的诱导表达效果不同，下调了成纤维细胞中Hoxc13 的表达，却上调了角质化细胞中Hoxc13的表达量。 3、过表达Hoxc13基因可能导致角质化细胞分化死亡，未能获得稳定表达 Hoxc13基因的角质化细胞克隆，但获得了稳定表达Hoxc13基因的成纤维细胞 系；皮肤成纤维细胞过表达Hoxc13，可促进TgfβrII、Rorα2、Nanog、Wnt10b 和PdgfrA的表达，抑制Bmp2、Msx2、Ntrk3和Detal基因的表达。 总之，Hoxc13基因在哺乳动物被毛的起源过程中发生了适应性进化，体 内外研究表明Hoxc13在绒山羊皮肤毛囊形态发生、周期性生长过程中扮演重 要角色。该论文为今后进一步研究绒山羊及其他毛用动物的毛囊发育机理奠 定了理论基础。 关键词：被毛；Hoxc13；进化；绒山羊；毛囊；载体 Expression Pattern and Function Analysis of Hoxc13 Gene in Skin of Cashmere Goat Abstract Cashmere goat is a very important economic animals provided wool and cashmere. Coat hair growth can be affected by many factors. Hoxc 13 has an important role in controlling hair formation through regulating keratin differentiation-specific genes. Hoxc13 deficient and overexpressing mice exhibit severe hair growth and patterning defects. Therefore, we detected the expression level of Hoxc13 in cashmere goat skin from different developmental phases of hair follicle; and investigated the effect and interaction relations for over-express