红豆杉细胞培养中紫杉醇代谢调节机理研究.pdf

庄晓蕾：河北师范大学2001植物学硕士论文 缩写词及专用名词 HPLC Chromatography高压液相色谱 High-PressureLiquid TLC chromatography薄层层析 Thin．1ayer NAA acid 萘乙酸 1-Naphthylacetic 6．BA amino 6-苄氨基嘌呤 6-Benzyl purine 2，4-D 2，4．二氯苯氧乙酸 栊牛儿栊牛儿焦磷 酸酯 MJ Methyljasmonate 茉莉酮酸甲酯 GA3 Gibberellin-A3 赤霉素 PVP Polyvinylpyrrolidone 聚乙烯吡咯烷酮 Vc Ascorbic C) 维生素C acid(vitamin Bacctin．III 浆果赤霉素-111 10一DABlO—dectyl-Bacctin—IlI 10-去乙酰一浆果赤 霉素Ⅲ 队L deaminase 苯丙氨酸解氨酶 Phenylalanine 摘要 紫杉醇是一种四环二萜酰胺类化合物，1992年底被美国FDA认证作 为抗癌药物上市。它广泛存在于红豆杉科红豆暨属植物中，但含量较低， 并常与无抗癌活性的紫杉烷类物质相伴而生。本研究分别利用HPLC法和 TLC．紫外分光光度法分离纯化并检测紫杉醇，均取得了较好效果，两种 方法具有各自的应用特点，前者适于精确定量，而后者可多用于实验室常 规粗略检测。 为了更好地了解细胞的生长、代谢特点，本实验同时使用几种代谢 水平不同的细胞进行比较研究。通过调节培养基中的激素浓度与组合来改 善细胞生长状况，发现不同的细胞株对同一培养条件反应各不相同。实验 中还发现，在细胞的生长周期中，三种细胞株的生长与紫杉醇积累之间具 有负相关的特性。在细胞生长前期，紫杉醇产量始终保持较高水平：而当 细胞生长率达到最高点时，产量迅速降到最低点，甚至为零；随生长率的 下降，紫杉醇量又有所回升。 在两种细胞的生长过程中，定期取样，分别检测细胞和培养基中的 紫杉烷类物质积累状况，结果表明紫杉醇积累的同时，baccatin-III也有一 定积累，且含量高于紫杉醇，但二者积累趋势相反，而10．DAB水平极低，， 应却被抑制，即主链与侧链汇合的反应是紫杉醇合成的一个限速步骤。在 继代后9天向培养基中添加Phe，发现紫杉醇产量升高，而baceafin．III含 量却降低。这与在细胞生长周期中，二者积累闻的关系相吻合。由此可见， baecatin．III与紫杉醇合成有直接相关性，可能为紫杉醇合成提供所需的碳 骨架。但紫杉醇与baccatin-III并不是以1：l的比例发生变化，说明细胞 内的baccatin．III还用于其他途径。厂7 在红豆杉细胞中，随细胞生长量的增加，PAL活性先是迅速上升，然 后又快速下降。但在不同细胞中PAL活性与细胞生长、紫杉醇合成的关系 不同，因此，它在紫杉醇代谢中的作用可能较复杂，还需更多的