霍山蹦蝗和意大利蝗全线粒体基因组测序及分析.pdf

霍山蹦蝗和意大利蝗全线粒体基因组的测序及分析 卢慧甍 摘要：线粒体DNA自上世纪70年代以来被广泛用于研究群体遗传结构，谱系地 的发展使得测寇大量分类单元线粒体全基因组的工作成为现实，目前己测定全线 粒体基因缀痒列豹磊生动蘩蠢745耱，其中琵交缨49耱，毽纛逮基琵宝只宥{}溯 飞蝗(上ocusta migratoria)和东方蝼蜡(Gryllotalpaorientalis)被测序。因此为了更加清 楚豹骚究昆虫线粒体鏊因组瀚差异及遂豫，急需对更多的壹邂舀琵斑全线粒俸羹 因组序列进行测序和分析。 为了探索宣翅目斑腿蝗科昆虫线粒体基因组的进化特征，本研究采用基于长 PCR的二次PCR策礁，结合克隆测序方法，对蠢翅基爨鼹蝗辩熬嚣瓣代表嶷虫霍 山蹦蝗(Sinopodisma houshana)和意大利蝗(Call驴tamusital缸us)全线粒体基因组进 嚣测痔魏锺装，分辑了它翻线粒髂基霞缓转基嚣鞫蛋叁矮缝戏、阉义密码孑差异、 级数据对系统袋奢关系进行黧建。褥赘黻下主要结论： 1．浆用了基于长PCR技术的二次PCR测序策略，解决了昆虫肌肉组织线粮 体筑他的闺难，莠避免了候旗困静干扰。通过缀合克隆灏序方法，降低了实验难 度，提赢了该策略的遇用性和稳定性，从丽建立起一套快速、精确她进行昆虫全 线粒体基因组测序的实验体系。 2。设计出了～襄u蠹翅晷昆虫全线粒棼基因缌扩增戆通用g|物，蒡藏功缝应用 到2种蠛虫的线粒体綦因组测序中。 3。鬟出蹦蝗亵意夫裂竣线粒镕全基嚣缀长发分裂洚t5818 bp程15667秘， 存在很强的碱熬AT组成偏向性。2个线粒体基因组均包含13种蛋白质基因、22 序与包括蝼蛄程内的多数蓖虫线粒体基因顺序存在倒鬣，而与蜜蜂相同。这种现 象赌示掇羼能簇逸重摊现象不一定具有弱源蛙。 5．两种蝗虫线粒体蛋白质基因都使用了ATN作为起始密码子，而COl基因 憨经矮了正拳黟ATC三联熬始密戮子，未窭现飞蝗蔽ATTA撵为起始密弼子魏壤 况。两种蝗虫除分别存在3个和2个不完艇的TA或T外，都以TAA或TAG作 莠终止密玛子。 6．两种蝗斑线粒体氨鏊酸和密码子静使用郡其有强烈静偏向往。存在tRNA 反密码予与高频率同义密码予不能严格匹配的现象，多数可通过GU配对来解决， tRNACK)和tRNA《M’剐通过反密码予第l使c的修饰以实现CA间不严格配对。 7。濒静蝗虫线粒体tRNA的二级结构多数为典型的三畸蘩形结构，毽 豹鹫巧终构，霹意大剥蝗tR．NA跏捌具完整维秘。它粕豹tRNA啦G砷具畜耀分舅 构现象，推断这种现象能够谯线粒体中存在并影响tRNA对密码子识别。对两种蝗 塞IrRNA第王v、V缡{奄域兹空阗絷擒缒颈灏显示它霰与飞缓乏霹交亿较小。 8．只有霍山蹦蝗线粒体AT富含区存在与飞蝗类似的两段紧密相连的道复序 弼。说弼该重簸结构并不是蝗亚爵的共丽待征，暗示该重复侉郧是蝗亚目在迸仡 中产生的衍征，而部分种类在进化中又可能将其丢失。 9．联合部分六足类动物的12种线粮体蛋白质序歹0重建的系统发育树短示， 斑褪蝗科与蝗双疑均舆有明漫靛单系蛀，跨半翅疆争}六足类羲黢元螅分类关系与 形态学观点基本一致。 该项磅究受到国家叁然科学基衾资囊，营次麸毙较及避豫麓霾终学舞疫对斑鼹 蟪科两种昆虫的线粒体基因组进行详细的研究，为理解线粒体基因缎结构和序列 避纯提镶重要线索和数据，恣为焉宪整线粒俸基疆组穿弼大耩模研究壹翅瓣高级 阶元及六足总纲各目之间的系统发商关系旗定了基础。借助成功设计的一套通用 弓l物，建立怒辩直翅箱昆虫全线粒体铡序工作的实验平台，为尽旱实现觚全线粒 体基因鳃水平完整研究直翅题系统发育关系提供重要保证。本论文所发现携 墩NA”间分异构现象，作为～种新的假说对线糙体分子功能与进化研究是～种补 充。嚣j}|：，该论文在跑较及避扰蓦鞠缀学、分子进纯秘分子系统学领域将懿霄重 要的实践价值和理论意义。 关键词：线粒体基因组，霍山蹦蝗，意大利蝗，比较及进化基因组学，系统发育 |l and houshanaand SequencingAnalysis