三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡过程中IκBα，核因子κB蛋白表达研究.pdf

蛳任太晕疆学院硒t学位话支 三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡过程中 IKB．a，核因子．KB蛋白表达的研究 浙江大学医学院 内科学(血液病) 00级硕士研究生 苏立达 导 师 张晓红 摘 要 背 景 自70年代以来，我国学者率先发现三氧化二砷(AS203)静脉滴注可有效治 疗急性早幼粒细胞性白血病(acute promyelocytic 的临床缓解率，目前也开始用于慢性粒细胞性白血病以及其他类型白血病的临床 治疗，其对白血病的作用机制主要是诱导白血病细胞凋亡和促进分化d目前对于 三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡过程中信号传导通路的改变机制还不甚明了。核 因子-KB(NF—KB)作为一类转录因子，在调控细胞增殖和凋亡相关基因的信号传 导中起到关键作用，近年来与肿瘤细胞凋亡的关系日益受到重视。我们研究了三 氧化二砷诱导白血病细胞株凋亡的情况以及细胞凋亡过程中伴随的凋亡信号传导 通路中关键因子NF—KB及其抑制蛋白IKB-o的变化。、一 材料与方法 大学血液病研究所提供。实验共设三氧化二砷实验组、空白对照组及阴性对照组， 三氧化二砷的实验用浓度范围1～16pM，监测时问点选择24小时。 l 塑竺查兰苎!竺!主!堡丝查 ———●—___————————_———_——__——__●——●———_^-_●-———_——__———__-—●——_-_—————————一 一—— 氧化二砷对三种细胞的诱导凋亡作用，间接荧光法测定细胞浆内IKB-Q蛋白的变 白表达。 结 果 研究结果表明不同的细胞系对三氧化二砷敏感性不同，K562，K562／ADR， 而且都呈剂量依赖性。FCM结果表明1～8uM的三氧化二砷作用24小时对上述 三种细胞系均有不同程度的诱导凋亡作用，其中K562对于三氧化二砷更敏感， 胞凋亡率，U937细胞凋亡率为16．32％。对于U937细胞当三氧化二砷浓度增至 16pM时可使细胞凋亡率增加到55．20％。 间接荧光法结果表明三氧化二砷作用K562细胞后胞浆中IKB-a蛋白阳性表达 率明显减少，由对照组的93．03％减少到8uM时的27．07％，且此降解作用呈剂 达无明显变化，对照组中K562，ADR细胞阳性表达率低于另外两株细胞。Westem 印迹法检测三氧化二砷作用后的三种细胞胞浆内IKB．-a蛋白结果与FCM相符。对 组成性表达。三氧化二砷作用后胞核内P65蛋白表达在K562细胞中明显增加。 一＼ K,562／ADR中无明显变化，而在U937细胞中有明显降低。k、 2 街旺太擘蜃学院硕士学谨论点 结 论 1 说明其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关。 表达，对有组成性激活的U937细胞可以抑制胞核内P65亚基的表达，而对由 药物诱导产生组成性激活的K562／ADR细胞的胞核内P65亚基的表达无影响。 所以NF·KB的组成性活性对三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡程度有重要影响。 蛋白表达率明显减少，而k562／ADR和U937细胞两者均无明显差异，表明 胞核内NF—KB的上调和胞浆中IKB—a的下调有关。 4 IKB—a与NF—KB系统在三氧化二砷诱导白血病细胞凋亡的信号传导途径中可能 是重要的调节因子。 关键词：砷剂； 细胞凋亡：白血病； 细胞系，K562； 细吠，嘹